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利用羅氏xCELLigence系統實時監測細胞粘附和伸展[創新技巧]
【字體: 大 中 小 】 時間:2008年11月26日 來源:生物通
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羅氏供稿 生物通翻譯 羅氏應用科學創新的xCELLigence系統讓研究人員能夠實時監測并定量評估細胞的粘附和伸展。這項技術是非侵入性的,也不需要費力且高成本的細胞標記及細胞裂解或固定。用戶利用這種快速經濟的方法,能在單個實驗中監測生物事件中基質蛋白的作用。
羅氏應用科學創新的xCELLigence系統讓研究人員能夠實時監測并定量評估細胞的粘附和伸展。這項技術是非侵入性的,也不需要費力且高成本的細胞標記及細胞裂解或固定。用戶利用這種快速經濟的方法,能在單個實驗中監測生物事件中基質蛋白的作用。
細胞外基質(ECM)蛋白如纖維連接蛋白與特定的細胞表面受體--整合素(Integrins)相互作用。整合素不僅調節細胞粘附,還通過與ECM蛋白的相互作用啟始細胞內的信號級聯反應,指導不同的胞內進程。不同生物表面的細胞粘附是動態、綜合的過程,需要細胞表面受體、結構和信號蛋白以及細胞骨架的參與。
在一項xCELLigence系統的測評實驗中,E-Plate包被了一層纖維連接蛋白或對照肽段。NIH3T3細胞接種到包被過的孔中,并通過測量阻抗變化并隨時記錄細胞指數(CI)單位,來監測期間細胞粘附和伸展的程度。當細胞接種在纖維連接蛋白包被的孔中,CI值顯著增加,而接種到對照肽段孔中的CI值僅僅緩慢增加。另外,阻抗測量顯示,纖維連接蛋白包被的細胞傳感器上的細胞粘附程度取決于纖維連接蛋白的濃度(已通過手工細胞計數來驗證)。這些數據支持了我們的設想----采用這項技術,細胞粘附和伸展可以在無標記的條件下進行實時定量的評估。
為了驗證整合素受體功能的擾動是否可通過這項阻抗技術來評估,成纖維細胞與整合素抑制肽段共同孵育,然后接種到纖維連接蛋白包被的E-Plate中。利用xCELLigence系統,證實抑制劑能以濃度依賴的方式阻礙NIH3T3細胞粘附和伸展,而對照肽段無此作用。
肌動蛋白解離試劑在細胞粘附和伸展中的作用也能利用xCELLigence系統來監測。成纖維細胞與肌動蛋白聚合抑制劑共同孵育,然后接種到纖維連接蛋白包被的E-Plate中。肌動蛋白聚合抑制劑的存在實際上以濃度依賴的方式抑制了細胞粘附和伸展。
參與整合素調節的細胞粘附和伸展的信號蛋白群還包括非受體酪氨酸激酶類的Src家族。研究表明通過siRNA干擾或諸如PP2的小分子抑制劑干擾Src表達或活性,會導致人癌癥細胞粘附和伸展的破壞,這一結果與xCELLigence系統的監測結果相符。
更多關于這項技術的信息,請訪問www.xcelligence.roche.com。
關于羅氏應用科學部
羅氏的診斷部門在成功收購德國寶靈曼公司(Boehringer Mannheim GmbH.)后,成立了專業服務于科學研究領域用戶的羅氏應用科學部(Roche Applied Science),憑借半個多世紀在生命科學研究領域積累的經驗,羅氏應用科學部已成為在此領域中具領先地位的試劑及系統供應商之一。從耗時少的,全自動的樣本制備系統(MagNA Lyser 和MagNA Pure),到快速精準的卡盤式LightCycler®1.5/2.0和模塊式高通量LightCycler®480系列熒光定量PCR儀,以及創新的超高通量基因組測序系統Genome Sequencer FLX Systemhe和NimbleGEN高密度DNA芯片,以及最新的xCELLigence高通量實時細胞分析檢測系統,羅氏應用科學部研究和開發了多種應用于分子生物學相關研究領域的系統和試劑產品――廣泛地應用在基因組學和蛋白組學研究中;同時羅氏應用科學部也提供用于生物醫藥和診斷行業方面的試劑,為用戶需求提供完整的解決方案。更多關于羅氏應用科學部信息,請訪問www.roche-applied-science.com。(編譯 生物通余亮 校對 吳青)