探索蛋白功能是很多人的研究方向。蛋白過表達是其中最經典的方法，不過蛋白表達的調控可不是一件容易的事。你可以通過RNAi在RNA水平對蛋白進行調控，不過要想在蛋白水平直接進行調控，卻無計可施。現在終于夢想成真了。Clontech公司革新的ProteoTuner系統就像一個收音機，讓蛋白想唱就唱。

ProteoTuner系統最初是由斯坦福大學的Thomas Wandless博士和他的同事開發的。2006年Wandless博士在Cell雜志上發表題為《A rapid, reversible, and tunable method to regulate protein function in living cells using synthetic small molecules.》的文章。幾天之內，他就收到超過五十個來自世界各地的研究團隊的來信請求分享這組試劑。這項技術也受到了全世界的關注，很多公司希望將它商業化。最終，表達巨頭Clontech公司獲得了專利授權。

ProteoTuner系統讓研究人員能利用小分子調控細胞內任何目的蛋白的表達水平，比RNAi更快更準。這項技術已經成功應用于多個物種和應用中，并在Cell、Nature Method、JBC上發表了多篇文章。

簡單但行而有效的技術
ProteoTuner系統有兩個主要元件來控制目的細胞的表達水平：

12 kDa的破壞穩定結構域（destabilizing domain, DD） 當它與目的蛋白融合時，就成為蛋白酶體降解的目標，從而破壞蛋白的穩定。載體上DD編碼序列位于多克隆位點（MCS）的上游。

膜通透性的小分子配體Shield1 它的分子量很小，只有750 Da。它能保護DD融合蛋白免受降解，使融合蛋白在細胞內累積。穩定作用只需15-30分鐘即可完成，不過為保險起見，最好還是做個時間進程實驗，來評估你的目的蛋白的穩定速率。Shield1的濃度可以根據目的蛋白量進行調節。Shield1也可以從細胞中洗脫出來，再次破壞細胞的穩定。這個過程是可逆的，而且可以反復操作很多次。

快速且可逆的步驟

一旦你的細胞被轉染/感染，ProteoTuner的操作步驟非常簡單快捷。為了維持目的蛋白的穩定，向細胞培養基中加入Shield1穩定配體，同時在另一份中不加入作為陰性對照。加入的Shield1能保護你的DD標簽蛋白不被蛋白酶體降解，在細胞內迅速積累。

相反地，為了降解你的目的蛋白，就將細胞轉移至不含Shield1的培養基中。沒有了Shield1的保護，目的細胞就迅速降解。同時，在另一份細胞持續加入Shield1作為陽性對照。

形式多樣
ProteoTuner系統有多個版本可供挑選，包括質粒、反轉錄病毒和慢病毒，你可以根據細胞系來自由選擇。另外，還有多種抗性標記，有/無熒光，詳見下表。

（生物通 余亮）