CellAmp^TM Whole Transcriptome Amplification Kit（for Real Time）

創(chuàng)新點：從少數(shù)細(xì)胞（數(shù)個～200個左右）起始，不需要進(jìn)行RNA和cDNA的精制，即可直接進(jìn)行高效率的cDNA擴增或?qū)�幾個基因進(jìn)行Real Time PCR解析。

特點：

從少數(shù)細(xì)胞（數(shù)個～200個左右）起始即可直接進(jìn)行高效率的cDNA擴增。

從少數(shù)細(xì)胞起始即可對幾個基因進(jìn)行Real Time PCR解析。

操作簡便，不需要進(jìn)行RNA和cDNA的精制。

可以對微量的RNA進(jìn)行cDNA擴增。

對于細(xì)胞數(shù)量非常有限的樣品來說，定量RT-PCR是研究其中基因表達(dá)模式的常用方法。然而，由于樣品量少或者非常珍貴，在純化過程中的樣品損失和產(chǎn)率的影響尤為關(guān)鍵，因此少量細(xì)胞的RNA的分離純化成為令人困擾的問題。

TaKaRa的CellAmp^TM Whole Transcriptome Amplification Kit（for Real Time）是從少數(shù)細(xì)胞直接反轉(zhuǎn)錄合成cDNA，然后對反轉(zhuǎn)錄的cDNA進(jìn)行擴增的試劑盒。擴增的cDNA可以作為Real Time PCR的模板使用。通常情況下，進(jìn)行微量核酸提取時，純化過程中核酸會有所損失，使用本制品不需要對細(xì)胞RNA和反轉(zhuǎn)錄的cDNA進(jìn)行純化，即可對反轉(zhuǎn)錄的cDNA高效擴增。

使用CellAmp^TM Whole Transcriptome Amplification Kit（for Real Time），首先溶解細(xì)胞，然后使用dT Adaptor Primer（RT dT Primer）進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)，由mRNA合成cDNA，通過TdT酶對合成的cDNA進(jìn)行dA加尾反應(yīng)后，以此作為模板進(jìn)行PCR反應(yīng)擴增cDNA。

操作簡便，不需要進(jìn)行RNA和cDNA的精制。從少數(shù)細(xì)胞起始即可對幾個基因進(jìn)行Real Time PCR解析，一次反應(yīng)得到的cDNA可以進(jìn)行2,000次以上的Real Time PCR解析。

操作流程如下：

CellAmp^TM Whole Transcriptome Amplification Kit（for Real Time）除了能從極少數(shù)細(xì)胞直接進(jìn)行cDNA擴增外，也可以對微量的RNA進(jìn)行cDNA擴增。

實驗例：按照CellAmp^TM Whole Transcriptome Amplification Kit（for Real Time）的操作方法，分別使用小鼠細(xì)胞（2、20、200個）以及小鼠Total RNA（20 pg、200 pg、2000 pg）作為起始材料進(jìn)行cDNA擴增，將擴增得到的cDNA 10倍稀釋后，取2 ml作為Real Time PCR的模板，進(jìn)行Real Time PCR反應(yīng)，檢定Mouse Rplp1基因。Real Time PCR反應(yīng)使用了SYBR^® Premix Ex Taq^TMⅡ（Perfect Real Time）（TaKaRa Code：DRR081）試劑盒；Real Time PCR儀使用了Thermal Cycler Dice^® Real Time System（TaKaRa Code：TP800）。

起始材料：小鼠細(xì)胞

起始材料：小鼠肝臟來源的Total RNA

上圖為使用Real Time PCR進(jìn)行Mouse Rplp1基因的檢出結(jié)果。分結(jié)果顯示，使用CellAmp^TM Whole Transcriptome Amplification Kit（for Real Time）能夠進(jìn)行高效率的cDNA合成和擴增，使用少量的細(xì)胞或Total RNA進(jìn)行cDNA的合成和擴增后便可以有效地進(jìn)行Real Time PCR反應(yīng)。