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        多功能 通用型 EmeraldAmp™ PCR Master Mix

        【字體: 時間:2009年10月21日 來源:生物通

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          EmeraldAmp™實現通用性強、簡單方便的PCR擴增反應,PCR反應液呈艷綠色,可以直接進行電泳,并且對GC rich模板也能進行良好擴增。

          

        創新點:EmeraldAmp™實現通用性強、簡單方便的PCR擴增反應,PCR反應液呈艷綠色,可以直接進行電泳,并且對GC rich模板也能進行良好擴增。


        特點:
        對GC rich模板也能進行良好擴增。
        操作簡便的預混型制品。
        可以進行Hot Start PCR反應。
        PCR反應液呈艷綠色,電泳時指示效果明顯。
        PCR擴增產物可以直接進行電泳。

        EmeraldAmp™ PCR Master Mix是PCR反應用各種試劑(酶、Buffer、dNTP Mixture等)的2倍濃度的預混型制品。DNA Polymerase使用了性能良好的Hot Start酶。使用本制品時,只需要在制品溶液中加入模板和引物便可進行PCR反應,簡化了操作步驟,減少了PCR操作過程中的污染。并且,本制品中已含有電泳時所必需的色素試劑(藍色和黃色色素),PCR反應后可以直接進行電泳。反應液為鮮艷的綠色(Emerald Green),電泳時指示效果明顯,容易觀察樣品的電泳位置。
        使用EmeraldAmp™ PCR Master Mix擴增得到的PCR產物3′端附有一個“A”堿基,可直接克隆于T-Vector中。EmeraldAmp™ PCR Master Mix對GC Rich模板也能得到良好擴增,以人基因組DNA為模板可以擴增10 kbp的DNA片段。

        PCR反應性能
        以人基因組DNA為模板,可以很好擴增8.5 kbp的DNA片段。

        電泳時色素Marker位置
        反應液5 ml,1% Agarose電泳時,藍色色素在3~5 kbp附近,黃色色素在50 bp以下位置。

        通常PCR反應使用量
        1. 按下列組份配制PCR反應液。

        EmeraldAmp™ PCR Master Mix 25 ml
        模板DNA*   X ml
        引物 1(20 mM) 0.5 ml
        引物 2(20 mM) 0.5  ml
        滅菌蒸餾水              Up to 50 ml

        *【50 ml PCR反應體系中模板DNA推薦使用量】
        人基因組DNA  50 ng~100 ng
        質粒DNA 1 pg~1 ng

        2. PCR反應條件。
        3 Step PCR
        98℃     10 sec
        55℃ or 60℃*  30 sec      
        72℃ 1 min/kbp
        30個循環

        * 擴增GC Rich模板時,退火溫度可以使用60℃。
        2 Step PCR
        98℃ 10  sec
        68℃ 1 min/kbp*    

        30個循環

        * 延伸時間設定在15 min以上時,擴增產物有時會產生Smear現象。

        應用例
        將插入5 kbp以上DNA片段的pUC118文庫進行轉化,對大腸桿菌菌落進行陽性克隆的篩選。

        電泳結果如下:

        1~8:菌落PCR反應液           
        M:λ-Hind III digest DNA Marker   

        1% Agarose;5 ml電泳

        通過電泳確認插入片段大小,選取PCR產物與目的片段大小一致的陽性菌落。

         

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