今年初，賽默飛世爾科技將芬蘭Finnzymes公司收歸旗下。為啥？看中的就是它豐富的PCR產品線，包括DNA聚合酶、迷你PCR儀、新型超薄壁PCR管和超薄壁PCR板等等。也許您還不大了解，那么就讓生物通小編來帶你看看Finnzymes的明星產品。

Phusion® DNA聚合酶是Finnzymes的拳頭產品，它所提供的PCR性能是其它DNA聚合酶無法比擬的。它的主要特點可用四個詞概括：超保真、超快速、超強勁、超特異。

這些是如何實現的呢？大家都知道，結構決定功能，那我們先來看看它的結構（下圖）。雙鏈DNA結合蛋白（紫色）與一種新型的具有校對功能的類熱球菌酶（綠色）融合，形成了一種獨特的高性能聚合酶——Phusion® DNA聚合酶。

雙鏈DNA結合蛋白的存在提高了聚合酶對雙鏈DNA的親和力，使得每次酶與雙鏈發生結合反應時都能夠摻入更多的核苷酸，并減少了鏈延伸所需的結合反應次數。Phusion® DNA聚合酶的處理能力大約是Pfu DNA聚合酶的10倍，是Taq DNA聚合酶的2倍。這種強大的處理能力不僅縮短了延伸時間，而且提高了酶的擴增性能，使其能夠在更短的時間里擴增更長的模板。另外，與傳統的具有校對功能的聚合酶相比，Phusion® DNA聚合酶用量更少，而產量更高。正是這些獨特的優點，使Phusion® DNA聚合酶同時適用于常規PCR和要求較高的PCR。

超保真——克隆好幫手

如果你下一步打算克隆，那選Phusion® DNA聚合酶一定沒錯了。它的錯配率極低，是高保真PCR的理想選擇。利用改良的lacI方法檢測，在HF緩沖液中，該酶的錯配率為4x10-7。這個數值比Taq DNA聚合酶大約低50倍，比Pfu DNA聚合酶還要低6倍。需要提醒的是，Phusion® DNA聚合酶產生的是平末端的PCR產物，TA克隆的話可要加A。

超快速——整體循環時間縮短

一般的高保真聚合酶都是慢吞吞的家伙，速度遠不及Taq酶，但Phusion® DNA聚合酶卻不是這樣。它的獨特結構決定了每次與DNA結合時都能夠摻入更多的核苷酸，延伸速度高達15-30s/kb。其高處理能力大大縮短了延伸步驟的時間，進而縮短了整個反應過程。如果你還想更快，可以選擇Phusion® Flash High-Fidelity PCR Master Mix，每kb 堿基的延伸時間僅為15 秒或更少。

由于其結構獨特，Phusion® DNA聚合酶的效率也非常高。在任何PCR反應中，該酶的用量顯著低于其他常見的聚合酶。Phusion® DNA聚合酶的高速度和高效率使得它能在最短時間內獲得高產量。

超強勁——減少反應失敗幾率

Finnzymes曾做過實驗，從Thermus sp.基因組文庫中隨機挑選16個克隆，并用3種不同的耐熱DNA聚合酶進行擴增。結果顯示，Phusion® DNA聚合酶具有強勁的性能和速度，它能夠成功擴增出隨機挑選的16個片段中的15個（94%），并且產量很高。而Pfu DNA聚合酶的成功率僅為56%，Taq DNA聚合酶成功率也才62%，二者的產量明顯低于Phusion® DNA聚合酶。而且從圖中可以看出，Phusion® DNA聚合酶的延伸時間和酶用量均顯著低于Pfu酶，與Taq相當，但產量更高。這些研究結果進一步證實了Phusion® DNA聚合酶的優異性能。

超特異——減少非特異擴增

如果你的模板比較復雜，建議選擇Phusion® 熱啟動II DNA聚合酶。這個第二代的Phusion® 酶在室溫時結合了一個Affibody®分子，因此活性被抑制，減少了反應過程中對DNA模板的非特異性擴增和PCR引物的降解。使用Phusion®熱啟動II DNA聚合酶，反應體系可在室溫條件下建立，也適用于高通量的自動化平臺。循環開始后，獨特的熱啟動技術讓酶瞬時激活，開始擴增。而且Affibody分子對退火溫度也沒啥嚴格要求，這樣就能使用多種引物，包括那些熔解溫度較低的引物。

有了這一手好牌，相信你對PCR應該滿懷信心了吧。別急，還有兩個好東西要介紹給你。要想實驗的進程更快，PCR本身是一方面，上游的樣品制備也需要耗費不少時間。核酸抽提，再跑個電泳，半天就過去了。因此，研究人員也在不斷開發新的產品，試圖跳過樣品制備，直接從樣品開始PCR。Finnzymes就不久前推出了幾個這樣的產品。

Phusion® Blood Direct PCR Kit（Phusion® 血液樣品直接PCR 試劑盒）就是為全血中DNA的擴增而設計的。它在PCR前無需純化DNA或進行樣品前處理。試劑盒中含有上面提到的Phusion® 熱啟動高保真DNA聚合酶，適合保真度要求高的實驗。此酶摻入率高，聚合能力強，對血液中存在的抑制劑具有極強的耐受能力，甚至當血液濃度高達 40% 時依然保持活性。Phusion® 血液樣品直接PCR 試劑盒包含一整套的優化試劑和對照引物，能夠對多種血液樣品進行分析。

試劑盒中的反應組分均針對血液PCR進行了優化，且與高性能的DNA聚合酶配合使用，能確保多數血液樣品都能夠得到卓越的PCR結果，這些樣品包括：含有肝素、檸檬酸和 EDTA的血液樣品、保存于不同類型的濾紙上的血液樣品，甚至是經過防腐劑處理的血液樣品。此外，試劑盒還可處理來源于不同種屬的血液樣品。

對于眾多的植物學研究人員，同樣有一個專為他們開發的試劑盒——Phire® Plant Direct PCR Kit（Phire® 植物樣品直接PCR試劑盒）。它能從植物樣品中直接擴增DNA，而無需預先抽提。試劑盒采用的是Phire® 熱啟動II DNA聚合酶，該酶是一種特殊的工程化酶，帶有獨特的DNA結合域。Phire® DNA聚合酶性能特別強勁，能夠耐受植物樣品中存在的多種抑制劑。試劑盒包含一整套的優化試劑，制樣工具和對照引物，使其成為擴增植物DNA的簡單而便捷的選擇。當與Piko® 熱循環儀和UTW® 管配合使用時，PCR過程在短短30分鐘內即可完成。

針對不同目的，有兩種實驗方案可供選擇。在直接PCR方案中，取少量植物樣品，直接置入PCR反應混合物，即可進行PCR反應。在稀釋方案中，將含有碾碎的植物樣品的稀釋緩沖液，取少量加入PCR反應混合物中。稀釋方案可用于長片段或難擴增的片段，以及從同一樣品中擴增多個DNA片段的實驗。

目前已對多種植物葉片和種子進行過測試，詳見http://www.finnzymes.com/pdf/materials_tested_with_phire_plant_directpcr_kit.pdf。

有了Phusion® DNA聚合酶及眾多試劑盒的協助，相信PCR不再是難題了吧。Finnzymes還在不斷推出更多的直接PCR試劑盒，欲了解最新動態，請關注生物通，或點擊索取最新資料。（生物通 余亮）