生物通報道：重組酶聚合酶擴(kuò)增RPA被稱為是可以替代PCR的核酸檢測技術(shù)。RPA擴(kuò)增的速度非常快，靈敏度高，對硬件設(shè)備要求低，而且不需要復(fù)雜的樣本處理。這樣的技術(shù)特別適合于體外診斷、獸醫(yī)、食品安全、生物防御、農(nóng)業(yè)等領(lǐng)域。

自人類對癌癥“宣戰(zhàn)”以來已經(jīng)過去了四十多年，這種惡性疾病仍舊是一團(tuán)揮之不去的陰影。統(tǒng)計數(shù)據(jù)表明，2012年世界上有15%的死亡是癌癥造成的。隨著發(fā)展中國家逐漸接納西方國家的飲食和生活方式，這一數(shù)字在未來幾十年中肯定還會上升，這無疑給發(fā)展中國家敲響了警鐘。

RPA用于癌癥突變檢測

新加坡A*STAR的研究團(tuán)隊(duì)去年六月在Lab on a Chip雜志上，發(fā)表了一種能夠快速檢測癌癥單點(diǎn)突變的新技術(shù)，等溫固相擴(kuò)增/檢測（ISAD）。這是一種無需標(biāo)記的實(shí)時檢測技術(shù)，將基于硅基微環(huán)（silicon microring）的固相擴(kuò)增與等溫重組酶聚合酶擴(kuò)增（RPA）結(jié)合在一起。

在這項(xiàng)研究中，ISAD主要用于檢測HRAS（Harvey RAS）基因的單點(diǎn)突變。在固相擴(kuò)增階段，引物直接連在設(shè)備的表面。在擴(kuò)增過程中，硅基微環(huán)諧振器會發(fā)生光的波長漂移，在此基礎(chǔ)上就能對擴(kuò)增DNA進(jìn)行檢測，不需要任何標(biāo)記。（延伸閱讀：核酸檢測的一場革命，可替代PCR的犀利技術(shù)）

研究顯示，與RPA和傳統(tǒng)PCR方法相比，ISAD技術(shù)的靈敏度要高一百倍。這個技術(shù)能夠在擴(kuò)增過程中區(qū)分HRAS基因的一個單點(diǎn)突變。由此可見，ISAD能夠用于突變、單核苷段多態(tài)性和癌癥指標(biāo)的檢測。（參考文獻(xiàn)：Real-time, label-free isothermal solid-phase amplification/detection (ISAD) device for rapid detection of genetic alteration in cancers.）

RPA用于抗癌藥物篩選

去年十月，Talanta雜志上也發(fā)表了一項(xiàng)用到RPA技術(shù)的癌癥研究。該研究在超靈敏生物條碼分析（BBC）、適配體（aptamer）和RPA的基礎(chǔ)上，開發(fā)了一個檢測細(xì)胞色素C（Cyto-c）的新生物條碼分析法（ABC）。細(xì)胞色素C是細(xì)胞死亡的重要標(biāo)志物。

適配體是一種單鏈短DNA，它折疊形成的3D結(jié)構(gòu)能夠結(jié)合特定的目標(biāo)分子，具有高親和力和特異性。

研究人員在BBC分析的基礎(chǔ)上進(jìn)行優(yōu)化，采用了Cyto-c特異性的適配子，并用等溫重組酶聚合酶擴(kuò)增（RPA）替代了耗時長的PCR。研究顯示，ABC分析的檢出限低至10 ng/mL，而且可以在三小時內(nèi)完成。研究人員用ABC方法對一些潛在的抗癌藥物進(jìn)行了體外測試，檢驗(yàn)了它們對不耐藥和多重耐藥性肝癌的殺傷效果。（參考文獻(xiàn)：An aptamer-based bio-barcode assay with isothermal recombinase polymerase amplification for cytochrome-c detection and anti-cancer drug screening.）

生物通編輯：葉予