從事蛋白研究常常會(huì)遇到這樣的問(wèn)題：

找不到合適的檢測(cè)低豐度蛋白的方法；
得不到令人信服的蛋白相互作用的結(jié)果；
擔(dān)心蛋白過(guò)表達(dá)或融合標(biāo)簽后會(huì)改變其原有的功能……

而今這些都不再成為問(wèn)題，來(lái)看看新一代蛋白研究利器——Duolink® PLA®技術(shù)到底有多強(qiáng)大。

與傳統(tǒng)的免疫測(cè)定相比，Duolink提供了一種簡(jiǎn)單、靈敏度高的原位檢測(cè)內(nèi)源蛋白的方法。該實(shí)驗(yàn)基于鄰位連接技術(shù)（Proximity Ligation Assay, PLA），當(dāng)一對(duì)PLA 探針足夠接近（<40 nm）時(shí)會(huì)產(chǎn)生PLA信號(hào)，PLA信號(hào)的位置直接反映了蛋白表達(dá)量或蛋白復(fù)合體的亞細(xì)胞定位。

了解Duolink 如何檢測(cè)過(guò)去使用Co-IP方法無(wú)法檢測(cè)到的蛋白質(zhì)間相互作用：
Smad蛋白質(zhì)與AP-1元件間的特殊相互作用決定了TGF-beta誘導(dǎo)的乳腺癌細(xì)胞侵襲。Sundqvist, A.等，Oncogene 2012年8月27日

了解Duolink如何檢測(cè)單磷酸化修飾：
對(duì)乳腺癌中異構(gòu)體特異性的Akt活化進(jìn)行鄰位連接分析鑒定得到活化的Akt1驅(qū)動(dòng)著癌癥演進(jìn)。Spears, M.等J. Pathol. 227, (2012).

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Duolink® 應(yīng)用舉例

1、檢測(cè)穩(wěn)定、瞬時(shí)和微弱的蛋白互作

Fig. 1 加入雌二醇培養(yǎng)48 hr的大鼠胚胎海馬神經(jīng)元，原位顯示ER α與DYX1C1在神經(jīng)突觸中的互作。
紅色：ER alpha/DYX1C1復(fù)合物；
綠色：actin蛋白；藍(lán)色：細(xì)胞核

2、檢測(cè)蛋白的翻譯后修飾

Fig. 2 EGF刺激前后，用免疫熒光染色和PLA方法檢測(cè)U343細(xì)胞中EGFR磷酸化水平的變化。PLA方法可以檢測(cè)到EGFR的激活，而IF方法則不能。
紅色：磷酸化的EGFR蛋白；藍(lán)色：細(xì)胞核

3、高靈敏性的檢測(cè)低豐度蛋白的表達(dá)

Fig. 3 分別用免疫熒光（左下圖）和PLA方法（上圖）檢測(cè)A431細(xì)胞中EGFR的表達(dá)。與IF方法相比，PLA方法的信噪比高出100倍。紅色：EGFR蛋白；藍(lán)色：細(xì)胞核

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