CRABP2過表達聯合全反式維甲酸協同抑制食管鱗癌進展的機制與治療意義

《Hormones & Cancer》：Combination of cellular retinoic acid-binding protein 2 overexpression and all-trans retinoic acid synergistically inhibits oesophageal squamous cell carcinoma progression

【字體： 大 中 小 】 時間：2025年12月05日 來源：Hormones & Cancer

　　

食管癌作為高發消化道惡性腫瘤，其鱗狀細胞癌(ESCC)亞型在中國新疆等地區呈現顯著地域聚集性。由于早期診斷困難，多數患者確診時已進展至中晚期，伴隨淋巴結轉移和低分化特征，導致五年生存率僅15%-25%。全反式維甲酸(ATRA)作為維甲酸(RA)異構體，在急性早幼粒細胞白血病治療中取得突破性進展，但其在實體瘤中的應用仍面臨挑戰。細胞視黃酸結合蛋白2(CRABP2)作為RA信號通路的關鍵載體蛋白，在ESCC組織中表達顯著下調，且與患者預后正相關，提示其可能成為ESCC治療的潛在靶點。

為探究CRABP2與ATRA的協同作用機制，研究團隊通過慢病毒轉染技術構建CRABP2過表達的KYSE-150細胞株，設立空白對照(OE-NC)、過表達組(OE-CRABP2)、ATRA干預組(OE-NC+ATRA)及聯合處理組(OE-CRABP2+ATRA)。采用CCK-8法檢測細胞增殖，流式細胞術分析細胞周期與凋亡，Transwell實驗評估遷移侵襲能力，并檢測活性氧(ROS)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)等氧化應激指標。通過蛋白質印跡(WB)和免疫熒光技術分析關鍵蛋白表達與定位，最后利用裸鼠移植瘤模型驗證體內抑瘤效果。

細胞功能實驗驗證協同抑癌效應

CCK-8實驗顯示，聯合處理組在第5天時OD值顯著低于其他組別(P<0.001)。流式細胞術檢測發現聯合處理組G0/G1期細胞比例升至53.59%，顯著高于單藥組。 Annexin V-FITC/PI雙染顯示聯合處理組凋亡率達31.03%，且以早期凋亡為主。Transwell實驗表明聯合處理組穿膜細胞數最少，證實協同抑制遷移侵襲的作用。

氧化應激與線粒體通路激活

聯合處理組呈現最高ROS積累、LDH釋放活性和MDA水平，SOD活性最低(P<0.001)。JC-1染色顯示該組線粒體膜電位(ΔΨm)下降最顯著，ATP含量降至最低。免疫熒光共定位顯示CRABP2核轉位增強伴隨線粒體紅色熒光減弱，提示線粒體損傷程度最大。

關鍵信號通路調控機制

WB檢測發現聯合處理組p53、cleaved caspase-3和RARγ表達顯著上調，磷酸化p65(p-p65)、FABP5和PPARβ/δ明顯下調。表明NF-κB通路抑制與p53通路激活共同參與凋亡誘導，且CRABP2過表達可能通過競爭性抑制FABP5/PPARβ/δ通路，促使RA偏向RARγ信號傳導。

體內實驗證實抑瘤效果

裸鼠移植瘤實驗顯示聯合處理組瘤體體積最小、生長最緩慢(P<0.01)。HE染色提示該組細胞分化程度改善，TUNEL染色顯示凋亡細胞數量最多。免疫組化顯示CRABP2和FABP5表達同步升高，Ki-67呈下降趨勢，但caspase-3表達無顯著差異。

本研究首次系統闡明CRABP2過表達可通過重塑RA信號傳導平衡，增強ESCC對ATRA的敏感性。其機制涉及多通路交叉調控：一方面通過升高CRABP2/FABP5比值促使ATRA偏向RARγ核轉位，激活p53依賴的凋亡通路；另一方面通過誘導線粒體功能障礙和氧化應激失衡，協同抑制NF-κB生存信號。該聯合策略為克服ESCC retinoid耐藥提供了新思路，CRABP2表達水平可能成為ATRA療效預測的生物標志物。未來需在多ESCC細胞系中驗證普適性，并探索與CYP26抑制劑或表觀遺傳調控劑的聯用方案，以推動臨床轉化。