ABSTRACT

本研究描述了一例早發(fā)性視桿-視錐細(xì)胞營(yíng)養(yǎng)不良伴中央黃斑萎縮患者中發(fā)現(xiàn)的IMPG2基因新型錯(cuò)義變異，并評(píng)估了腺嘌呤堿基編輯（ABE）作為治療策略的潛力。眼科評(píng)估包括超廣角眼底照相、眼底自發(fā)熒光和光譜域光學(xué)相干斷層掃描。基因檢測(cè)采用靶向下一代測(cè)序panel并進(jìn)行桑格測(cè)序驗(yàn)證。通過(guò)計(jì)算機(jī)預(yù)測(cè)工具、蛋白穩(wěn)定性算法和結(jié)構(gòu)建模評(píng)估了變異的致病性。通過(guò)PAM位點(diǎn)識(shí)別和向?qū)�RNA設(shè)計(jì)分析了ABE的可行性。

遺傳測(cè)試結(jié)果顯示患者復(fù)合雜合了一個(gè)致病性無(wú)義變異（c.411G>A; p.Trp137*）和一個(gè)位于SEA-1結(jié)構(gòu)域內(nèi)的新型錯(cuò)義變異（c.871C>A; p.Arg291Ser）。雖然計(jì)算機(jī)預(yù)測(cè)工具將p.Arg291Ser分類為良性或中性，但結(jié)構(gòu)建模和穩(wěn)定性分析支持其具有去穩(wěn)定化效應(yīng)。堿基編輯評(píng)估表明c.411G>A可通過(guò)ABE進(jìn)行靶向糾正。本病例強(qiáng)調(diào)了IMPG2基因結(jié)構(gòu)域特異性變異的臨床相關(guān)性以及計(jì)算機(jī)預(yù)測(cè)的局限性。ABE為IMPG2相關(guān)視網(wǎng)膜病變提供了一個(gè)有前景的治療選擇。

光感受器間基質(zhì)蛋白聚糖-2（IMPG2，OMIM 607056）編碼一種1241個(gè)氨基酸的蛋白聚糖（約138.5 kDa），也稱為IPM200或SPACRCAN。該蛋白包含一個(gè)信號(hào)肽、兩個(gè)SEA（海膽精子蛋白、腸激酶、聚集蛋白）結(jié)構(gòu)域、兩個(gè)EGF樣結(jié)構(gòu)域、一個(gè)跨膜區(qū)和一個(gè)胞質(zhì)尾區(qū)。它由光感受器合成并分泌到光感受器間基質(zhì)中，參與視網(wǎng)膜結(jié)構(gòu)、粘附和光感受器功能。

IMPG2的致病性變異與一系列視網(wǎng)膜疾病相關(guān)，包括常染色體隱性（AR）早發(fā)性伴黃斑受累的視桿-視錐細(xì)胞營(yíng)養(yǎng)不良、常染色體顯性（AD）成人發(fā)病的卵黃樣黃斑營(yíng)養(yǎng)不良（AVMD）、雜合攜帶者的單側(cè)卵黃樣病變以及類Stargardt青少年黃斑病變。

目前尚無(wú)批準(zhǔn)用于IMPG2相關(guān)視網(wǎng)膜病變的治療方法。雖然基因替代療法對(duì)幾種AR視網(wǎng)膜營(yíng)養(yǎng)不良有效，但其在IMPG2上的應(yīng)用受限于該基因的大尺寸。CRISPR DNA堿基編輯已成為一種有前景的替代方案，它能夠不可逆地糾正所有轉(zhuǎn)換變異，且不引入雙鏈DNA斷裂。這種方法提高了體內(nèi)安全性，特別適用于靶向光感受器等有絲分裂后細(xì)胞。

堿基編輯器由催化活性受損的CRISPR核酸內(nèi)切酶（切口酶）與核苷特異性脫氨酶融合而成，通過(guò)gRNA引導(dǎo)至靶位點(diǎn)。最常用的堿基編輯器包括胞嘧啶堿基編輯器（CBE）和腺嘌呤堿基編輯器（ABE）。CBE將C轉(zhuǎn)換為T(mén)，而ABE將A轉(zhuǎn)換為G，當(dāng)合適的原型間隔子相鄰基序（PAM）序列將變異置于編輯窗口內(nèi)時(shí)，可實(shí)現(xiàn)精確的單堿基校正。

我們報(bào)告一例早發(fā)性視桿-視錐細(xì)胞營(yíng)養(yǎng)不良伴中央黃斑萎縮的男性患者，該患者在過(guò)去9年間于我們的三級(jí)轉(zhuǎn)診中心接受縱向隨訪。患者目前72歲，在二十歲出頭時(shí)出現(xiàn)夜盲癥，隨后數(shù)十年視力緩慢進(jìn)行性下降。在最近一次評(píng)估中，其最佳矯正視力為雙眼指數(shù)，這一水平在整個(gè)隨訪期間基本保持穩(wěn)定。

眼底檢查顯示周邊骨細(xì)胞樣色素沉著、視網(wǎng)膜血管變細(xì)以及中央黃斑萎縮伴中心凹周圍區(qū)域部分保留。在九年隨訪期間重復(fù)進(jìn)行的多模態(tài)成像——包括超廣角眼底照相、眼底自發(fā)熒光和SD-OCT——顯示視網(wǎng)膜結(jié)構(gòu)改變無(wú)明顯進(jìn)展。

基因檢測(cè)顯示IMPG2基因存在復(fù)合雜合變異：一個(gè)已知的致病性無(wú)義變異（c.411G>A; p.Trp137*）和一個(gè)位于SEA-1結(jié)構(gòu)域保守基序內(nèi)的新型錯(cuò)義變異（c.871C>A; p.Arg291Ser）。

考慮到患者就診時(shí)年齡較大且表型已完全確立，未進(jìn)行全視野視網(wǎng)膜電圖或Goldmann視野檢查。

鑒于該基因與腺相關(guān)病毒（AAV）載體為基礎(chǔ)的基因增強(qiáng)方法不兼容，我們進(jìn)一步研究了ABE作為潛在治療策略的可行性。

患者在牛津眼科醫(yī)院接受了全面的眼科評(píng)估。臨床數(shù)據(jù)和基因檢測(cè)作為常規(guī)臨床護(hù)理的一部分獲得，所有信息均為回顧性收集。所有程序均遵循《赫爾辛基宣言》的倫理標(biāo)準(zhǔn)和當(dāng)?shù)貦C(jī)構(gòu)審查委員會(huì)的指導(dǎo)方針。獲得了患者關(guān)于發(fā)布臨床數(shù)據(jù)和視網(wǎng)膜圖像的書(shū)面知情同意。視網(wǎng)膜成像包括使用Optomap P200系統(tǒng)的偽彩色超廣角眼底照相和眼底自發(fā)熒光（FAF），以及使用Spectralis平臺(tái)進(jìn)行的SD-OCT。

獲得了患者DNA血樣的知情同意，樣本被送往牛津區(qū)域遺傳學(xué)實(shí)驗(yàn)室。使用定制的HaloPlex靶向富集系統(tǒng)擴(kuò)增目標(biāo)基因的編碼區(qū)和內(nèi)含子/外顯子邊界（±10 bp），最后在威康信托人類遺傳學(xué)中心的高通量基因組學(xué)組使用Illumina MiSeq儀器進(jìn)行測(cè)序。對(duì)111個(gè)與RP和RP樣表型相關(guān)的基因進(jìn)行了分子分析。檢測(cè)到的變異通過(guò)桑格測(cè)序確認(rèn)。

使用成熟的計(jì)算機(jī)工具評(píng)估變異致病性，包括SIFT、PolyPhen-2、PROVEAN和MutationTaster，這些工具評(píng)估進(jìn)化保守性并預(yù)測(cè)氨基酸替換的功能影響。

使用DynaMut2、mCSM、I-Mutant3.0和MuPRO評(píng)估p.Arg291Ser替換對(duì)IMPG2蛋白穩(wěn)定性的影響。這些工具基于序列和/或結(jié)構(gòu)特征預(yù)測(cè)變異誘導(dǎo)的穩(wěn)定性變化（ΔΔG）；負(fù)ΔΔG值表明去穩(wěn)定化。由于IMPG2的結(jié)構(gòu)尚未通過(guò)實(shí)驗(yàn)確定，我們使用了通過(guò)AlphaFold2算法生成并由AlphaFold數(shù)據(jù)庫(kù)提供的IMPG2模型。使用PyMOL生成原子分子可視化圖。為了獲得其他含SEA結(jié)構(gòu)域蛋白的解析結(jié)構(gòu)，我們使用相關(guān)搜索詞查詢UniProt和蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)庫(kù)（PDB），并手動(dòng)篩選出在單條鏈上編碼的真正SEA結(jié)構(gòu)域。

為了評(píng)估已識(shí)別可能致病變異的可編輯性，首先根據(jù)變異類型分析其是否適合堿基編輯。然后，分析變異周圍的序列，尋找可用的PAM位點(diǎn)，以便將目標(biāo)核苷酸置于SpCas9-ABE8e、SaCas9-ABE8e、KKH-SaCas9-ABE8e或CasMini-ABE8e（最常用的堿基編輯構(gòu)建體）的編輯窗口內(nèi)，并使用Benchling軟件相應(yīng)設(shè)計(jì)向?qū)�RNA。最后，分析這些向?qū)�RNA引入不必要旁觀者編輯的可能性，并使用PolyPhen-2預(yù)測(cè)其致病性。所有分析均使用GRCh37/h19基因組版本和IMPG2轉(zhuǎn)錄本ENST00000193391。

眼科評(píng)估揭示了視桿-視錐細(xì)胞營(yíng)養(yǎng)不良表型，伴有中周部骨細(xì)胞樣色素沉積、視網(wǎng)膜血管變細(xì)以及被中心凹周圍保留環(huán)包圍的中央黃斑萎縮。FAF顯示中心凹和視盤(pán)周圍自發(fā)熒光減弱，中心黃斑周圍環(huán)繞著高自發(fā)熒光環(huán)，中周部存在廣泛的融合性低自發(fā)熒光病灶。SD-OCT顯示中心凹和視盤(pán)周圍外層視網(wǎng)膜萎縮及橢球體帶破壞，而中央黃斑以外的視網(wǎng)膜色素上皮相對(duì)保留。

下一代測(cè)序鑒定出IMPG2基因存在復(fù)合雜合變異。c.411G>A變異導(dǎo)致提前終止密碼子（p.Trp137*），是一個(gè)已知的致病性變異。第二個(gè)變異c.871C>A（p.Arg291Ser）是一個(gè)新型錯(cuò)義變異。由于父母均已去世且患者的姐姐拒絕進(jìn)行基因檢測(cè)，無(wú)法進(jìn)行分離分析。

使用多種計(jì)算機(jī)預(yù)測(cè)工具評(píng)估p.Arg291Ser變異。SIFT預(yù)測(cè)該替換為耐受（評(píng)分：0.09；閾值<0.05），而PROVEAN將其分類為中性（評(píng)分：-2.409；臨界值=-2.5）。PolyPhen-2返回良性預(yù)測(cè)（評(píng)分：0.242），MutationTaster以高置信度（概率：0.9999998）將該變異識(shí)別為多態(tài)性。

我們首先從AlphaFold數(shù)據(jù)庫(kù)獲取了IMPG2的3D結(jié)構(gòu)模型，因?yàn)槟壳吧袩o(wú)IMPG2的實(shí)驗(yàn)解析結(jié)構(gòu)。序列的某些區(qū)域結(jié)構(gòu)未定義，這可能與內(nèi)在無(wú)序性有關(guān)，或反映了AlphaFold2訓(xùn)練集中類似序列數(shù)據(jù)的缺乏。然而，包括含有p.Arg291的SEA結(jié)構(gòu)域在內(nèi)的幾個(gè)結(jié)構(gòu)域似乎建模良好，具有高或極佳的預(yù)測(cè)局部距離差異測(cè)試（pLDDT）置信度評(píng)分。p.Arg291周圍的區(qū)域建模尤其可信，pLDDT評(píng)分≥0.88。

隨后，我們使用多個(gè)考慮結(jié)構(gòu)和序列的獨(dú)立預(yù)測(cè)工具評(píng)估了p.Arg291Ser替換對(duì)IMPG2蛋白穩(wěn)定性的影響。DynaMut2基于與p.Glu289的鹽橋丟失和與p.Thr312的氫鍵丟失，預(yù)測(cè)了去穩(wěn)定化變化（ΔΔG = -1.02 kcal/mol），表明突變蛋白的熱力學(xué)穩(wěn)定性降低。在該位置的所有單點(diǎn)變異中，Ser291的穩(wěn)定性排名位于后四分之一。類似地，mCSM得出ΔΔG為-1.276 kcal/mol，支持去穩(wěn)定化效應(yīng)。I-Mutant2.0也預(yù)測(cè)在生理?xiàng)l件下（pH 7.0，25°C）穩(wěn)定性降低，具有高可靠性指數(shù)（RI=8）。MuPRO進(jìn)一步預(yù)測(cè)了去穩(wěn)定化效應(yīng)（ΔΔG = -1.11 kcal/mol），SVM（置信度評(píng)分：-0.95）和基于神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)的分析（-0.99）均證實(shí)了這一點(diǎn)。

最后，我們還探索了PDB中可用的已解析單體SEA結(jié)構(gòu)域結(jié)構(gòu)。我們的分析揭示了一個(gè)反復(fù)出現(xiàn)的基序，即鏈2上的一個(gè)精氨酸殘基在鏈2和鏈3之間形成協(xié)調(diào)的極性相互作用，補(bǔ)充了骨架氫鍵網(wǎng)絡(luò)。盡管位于鏈2的不同位置，但在所有β-片層鏈在單條多肽鏈內(nèi)編碼的三個(gè)已解析結(jié)構(gòu)中均觀察到了這種相互作用基序。這種保守相互作用在已解析結(jié)構(gòu)中的存在，增強(qiáng)了對(duì)IMPG2模型中p.Arg291周圍側(cè)鏈預(yù)測(cè)的信心，并表明由精氨酸介導(dǎo)的輔助穩(wěn)定網(wǎng)絡(luò)可能起關(guān)鍵作用。它可能通過(guò)促進(jìn)鏈3與鏈2的穩(wěn)健堆積來(lái)輔助折疊，從而促進(jìn)該單元隨后組裝到鏈1上，或者直接有助于常規(guī)完全折疊蛋白的功能。

在基因檢測(cè)中識(shí)別出的兩個(gè)可能致病變異中，已知的致病性無(wú)義變異（c.411G>A; p.Trp137*）作為G-to-A轉(zhuǎn)換單核苷酸變異（SNV），理論上可以通過(guò)腺嘌呤堿基編輯器糾正，因此相應(yīng)地評(píng)估了合適PAM位點(diǎn)的可用性。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，有一個(gè)可用于SpCas9-ABE8e的PAM位點(diǎn)，兩個(gè)可用于SaCas9-ABE8e和KKH-SaCas9-ABE8e的PAM位點(diǎn)，并據(jù)此設(shè)計(jì)了向?qū)�RNA。為了評(píng)估這些旁觀者編輯的可能致病性，使用PolyPhen-2分析了引入的錯(cuò)義變化，表明p.(Tyr136Cys)可能具有破壞性（評(píng)分0.985，滿分1.000），p.(Asn139Gly)可能具有破壞性（評(píng)分0.712），而其他氨基酸變化預(yù)測(cè)為良性：p.(Met138Val)評(píng)分0.068，p.(Asn139Asp)評(píng)分0.006，p.(Asn139Ser)評(píng)分0.024。在所測(cè)試的設(shè)計(jì)中，SpCas9-ABE8e成為最合適的構(gòu)建體，因?yàn)樗鼉H引入單個(gè)良性旁觀者編輯（p.Met138Val），而基于SaCas9的編輯器產(chǎn)生了額外的預(yù)測(cè)可能具有破壞性的旁觀者替換。

患者的另一個(gè)變異c.871C>A, p.(Arg291Ser)作為C-to-A顛換SNV，無(wú)法用當(dāng)前的堿基編輯器糾正，因?yàn)樗鼈儾荒芤�入A-to-C編輯。然而，另一種稱為 prime editing (PE) 的CRISPR基因編輯方法可能適用于新療法開(kāi)發(fā)，因?yàn)镻E可以糾正所有SNV以及許多小的插入缺失。此外，糾正c.411G>A無(wú)義變異可能提供治療益處，因?yàn)榛颊邤y帶與隱性IMPG2疾病一致的雙等位基因致病性變異，恢復(fù)一個(gè)功能性等位基因可能就足夠了。

先前研究表明，IMPG2的單等位基因變異通常與卵黃樣黃斑病變相關(guān)，而雙等位基因變異會(huì)導(dǎo)致更嚴(yán)重的表型，例如早發(fā)性黃斑萎縮的視桿-視錐細(xì)胞營(yíng)養(yǎng)不良。

我們的患者被發(fā)現(xiàn)攜帶一個(gè)已知的致病性無(wú)義變異（c.411G>A; p.Trp137*）和一個(gè)新型錯(cuò)義變異（c.871C>A; p.Arg291Ser），該變異影響IMPG2 SEA-1結(jié)構(gòu)域內(nèi)一個(gè)高度保守的殘基。

與先前報(bào)道的復(fù)合雜合病例一致，該患者表現(xiàn)出相對(duì)早期的中心凹萎縮，這與周邊視網(wǎng)膜變性的程度似乎不成比例。這一發(fā)現(xiàn)支持了越來(lái)越多的證據(jù)，表明即使IMPG2的復(fù)合雜合變異也可能導(dǎo)致顯著的結(jié)構(gòu)和功能破壞，特別是當(dāng)位于功能關(guān)鍵結(jié)構(gòu)域時(shí)。

值得注意的是，該新型變異位于SEA-1結(jié)構(gòu)域內(nèi)，這是一個(gè)進(jìn)化上保守的區(qū)域，已知對(duì)蛋白水解加工、蛋白分泌和光感受器間基質(zhì)內(nèi)的定位很重要。IMPG2包含兩個(gè)SEA結(jié)構(gòu)域：SEA-1（非蛋白水解性）和SEA-2（蛋白水解性）。影響這些結(jié)構(gòu)域的變異在視網(wǎng)膜疾病中已有充分記載。

SEA-1結(jié)構(gòu)域內(nèi)的幾個(gè)錯(cuò)義、無(wú)義和剪接變異——包括p.(Ala243Pro)、p.(Leu249Phe)、p.(Glu272)、p.(Glu276)、c.828+1G>A、c.828+1961_908+1073del、c.829-1G>T、p.(Arg296_Asp302del)、c.909-802_1154-539del、p.(Gly304Asp)和p.(Tyr349Ilefs*)——已被分類為致病性或可能致病性，并與AR視桿-視錐細(xì)胞營(yíng)養(yǎng)不良或AVMD相關(guān)。這些背景證據(jù)強(qiáng)烈支持p.Arg291Ser變異可能引起類似功能破壞的假設(shè)。

然而，計(jì)算機(jī)預(yù)測(cè)工具（如PolyPhen-2、SIFT和CADD）返回了相互矛盾但總體良性的結(jié)果，導(dǎo)致根據(jù)美國(guó)醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)與基因組學(xué)學(xué)會(huì)（ACMG）指南將p.Arg291Ser分類為意義不明確的變異（VUS）。

但是，常用的錯(cuò)義致病性預(yù)測(cè)因子（如SIFT、PolyPhen-2、CADD）并不總能捕捉到結(jié)構(gòu)域特異性結(jié)構(gòu)破壞的功能后果。IMPG1，一種旁系同源蛋白聚糖，說(shuō)明了這一局限性。IMPG1 p.Leu740Phe變異最初被計(jì)算工具預(yù)測(cè)為“可能良性”，但隨后的生化分析揭示了顯著的物理化學(xué)擾動(dòng)，包括改變的分子量、等電點(diǎn)和穩(wěn)定性指數(shù)。

類似地，同義變異也可能被錯(cuò)誤分類為良性。例如，CDHR1 c.783G>A變異（rs147346345）不改變氨基酸序列，因其在人群數(shù)據(jù)庫(kù)中相對(duì)較高的次要等位基因頻率（0.31%）和純合個(gè)體出現(xiàn)而被計(jì)算機(jī)預(yù)測(cè)所忽略。然而，患者來(lái)源的RNA分析顯示，它誘導(dǎo)了第8外顯子跳躍，導(dǎo)致框內(nèi)缺失，破壞了CDHR1蛋白的關(guān)鍵胞外結(jié)構(gòu)域，并導(dǎo)致中心性暈輪狀脈絡(luò)膜營(yíng)養(yǎng)不良。

在p.Arg291Ser的案例中，多條替代證據(jù)線索提示功能破壞。確實(shí)，患者表現(xiàn)為早發(fā)性伴黃斑受累的視桿-視錐細(xì)胞營(yíng)養(yǎng)不良，這與AR IMPG2相關(guān)視網(wǎng)膜病變的嚴(yán)重表型譜一致。此外，Arg291位于結(jié)構(gòu)關(guān)鍵的SEA-1結(jié)構(gòu)域內(nèi)，該區(qū)域先前已描述過(guò)其他幾個(gè)致病的錯(cuò)義變異。IMPG2的SEA-1結(jié)構(gòu)域位于預(yù)測(cè)的粘蛋白樣序列內(nèi)，該序列在蛋白質(zhì)的正確糖基化和細(xì)胞運(yùn)輸中起作用。值得注意的是，SEA-1包含兩個(gè)N-連接糖基化位點(diǎn)，破壞該結(jié)構(gòu)域可能會(huì)損害IMPG2向細(xì)胞膜的靶向，最終影響其在光感受器間基質(zhì)內(nèi)的功能。此外，精氨酸和絲氨酸殘基的大小顯著不同，并且具有不同的化學(xué)性質(zhì)，在結(jié)構(gòu)中的相同相對(duì)位置上可能不兼容。在此，我們展示了所有四個(gè)基于結(jié)構(gòu)和序列的獨(dú)立穩(wěn)定性預(yù)測(cè)工具均表明p.Arg291Ser替換對(duì)IMPG2蛋白SEA-1結(jié)構(gòu)域具有去穩(wěn)定化影響。單體SEA結(jié)構(gòu)域中鏈2上精氨酸與鏈3上極性/帶電殘基之間基序的進(jìn)化保守性表明鏈2精氨酸在成功分子組裝中起作用。然而，我們注意到R291可能對(duì)IMPG2有其他關(guān)鍵的功能貢獻(xiàn)，這些無(wú)法通過(guò)單獨(dú)的結(jié)構(gòu)建模檢測(cè)到。

鑒于表型的嚴(yán)重性以及與IMPG2相關(guān)的視網(wǎng)膜營(yíng)養(yǎng)不良譜系，開(kāi)發(fā)靶向治療策略日益迫切。鑒于IMPG2的大編碼序列與傳統(tǒng)AAV介導(dǎo)的基因增強(qiáng)策略不兼容，ABE作為等位基因特異性糾正的一種有前景的治療替代方案脫穎而出。使用靶向前鏈的ABE，理論上可以進(jìn)行精確的DNA編輯，將c.411G>A無(wú)義變異恢復(fù)為野生型序列，從而恢復(fù)全長(zhǎng)IMPG2蛋白。在該區(qū)域識(shí)別出了適用于SpCas9-ABE8e、SaCas9-ABE8e和KKH-SaCas9-ABE8e的合適PAM位點(diǎn)，其中SpCas9-ABE8e構(gòu)建體可能僅引入單個(gè)旁觀者編輯（p.Met138Val），該變化預(yù)測(cè)在結(jié)構(gòu)上是可耐受的。

由于該患者的IMPG2相關(guān)視網(wǎng)膜病變最可能以AR方式遺傳，僅糾正無(wú)義變異預(yù)期即可帶來(lái)治療益處。對(duì)于c.871C>A（p.Arg291Ser）變異，用當(dāng)前的ABE系統(tǒng)恢復(fù)為野生型密碼子不可行；然而，編輯可能產(chǎn)生替代的氨基酸替換，其結(jié)構(gòu)和功能后果需要進(jìn)一步研究。

本病例闡釋了在遺傳性視網(wǎng)膜疾病中解讀VUS的復(fù)雜性。盡管計(jì)算機(jī)預(yù)測(cè)工具將新型IMPG2錯(cuò)義變異（p.Arg291Ser）分類為良性或中性，但結(jié)構(gòu)建模和蛋白穩(wěn)定性分析表明其在SEA-1結(jié)構(gòu)域內(nèi)具有去穩(wěn)定化效應(yīng)，支持其致病潛力。結(jié)合患者的早發(fā)性黃斑萎縮型視桿-視錐細(xì)胞營(yíng)養(yǎng)不良表型，這些發(fā)現(xiàn)擴(kuò)展了IMPG2相關(guān)視網(wǎng)膜病變的譜系，并強(qiáng)調(diào)了計(jì)算機(jī)預(yù)測(cè)在孤立使用時(shí)的局限性。

在治療方面，IMPG2的大尺寸排除了傳統(tǒng)的AAV介導(dǎo)的基因增強(qiáng)。相比之下，ABE提供了一種有前景的等位基因特異性糾正策略，特別是對(duì)于無(wú)義轉(zhuǎn)換變異（c.411G>A; p.Trp137*），該變異理論上可用現(xiàn)有的ABE系統(tǒng)靶向。

缺乏分離分析、功能驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)以及治療建模的探索性性質(zhì)是本研究的局限性。盡管如此，臨床、結(jié)構(gòu)和分子數(shù)據(jù)的整合為變異解讀提供了穩(wěn)健的框架，并指向基因組編輯技術(shù)作為IMPG2相關(guān)視網(wǎng)膜病變的未來(lái)治療途徑。

數(shù)據(jù)可用性聲明

支持本研究結(jié)果的數(shù)據(jù)可根據(jù)合理要求從通訊作者處獲取。