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        綜述:CRISPR/Cas9基因編輯系統(tǒng)在微藻代謝工程中的應(yīng)用以及功能性食品成分的合成策略

        《Biotechnology Advances》:Application of CRISPR/Cas9 gene editing system in microalgal metabolic engineering and synthetic strategies of functional food ingredients

        【字體: 時間:2026年01月05日 來源:Biotechnology Advances 12.5

        編輯推薦:

          CRISPR/Cas9技術(shù)通過精準編輯微藻代謝通路,顯著提升高價值營養(yǎng)素如不飽和脂肪酸、功能性蛋白及色素的產(chǎn)量,同時面臨細胞壁強、轉(zhuǎn)化效率低等挑戰(zhàn),需優(yōu)化sgRNA設(shè)計和高保真Cas9酶以推動微藻成為可持續(xù)的“細胞工廠”。

          
        朱偉普|薛旺|陳一涵|李繼山|何欣欣|陳偉超|趙超
        福建農(nóng)林大學(xué)海洋科學(xué)學(xué)院,福州350002,中國

        摘要

        微藻是天然且可持續(xù)的生物資源,富含脂質(zhì)、蛋白質(zhì)和功能性色素等高價值營養(yǎng)成分,在功能性食品、膳食補充劑和天然色素領(lǐng)域具有巨大潛力。然而,天然微藻中目標成分的產(chǎn)量往往不足以滿足商業(yè)化需求。CRISPR/Cas9基因編輯系統(tǒng)是一種革命性技術(shù),能夠精確有效地改進微藻,提升其營養(yǎng)價值和產(chǎn)量。本文首先概述了CRISPR/Cas9系統(tǒng)的基本原理,包括其核心組成部分和基因編輯機制,然后總結(jié)了該技術(shù)在微藻中的應(yīng)用,重點介紹了通過修改代謝途徑來富集特定營養(yǎng)成分的成功案例,如增加脂質(zhì)中的不飽和脂肪酸含量、提高可食用蛋白質(zhì)的比例以及豐富具有抗氧化特性的天然色素。此外,本文還討論了將這項技術(shù)應(yīng)用于微藻時面臨的主要挑戰(zhàn),包括由于細胞壁堅硬導(dǎo)致的遞送困難、遺傳轉(zhuǎn)化效率低以及脫靶效應(yīng)的風險。最后,本文提出了應(yīng)對這些挑戰(zhàn)的前沿策略,如開發(fā)高保真度的Cas9酶和優(yōu)化單導(dǎo)向RNA(sgRNA)設(shè)計。這些技術(shù)的持續(xù)進步正推動微藻成為高效且可持續(xù)的“細胞工廠”,為食品工業(yè)提供更多天然、健康和高價值的功能性成分。

        引言

        微藻具有豐富的生物多樣性,目前已發(fā)現(xiàn)約50,000種。它們在自然生態(tài)系統(tǒng)中通過促進物質(zhì)循環(huán)發(fā)揮著關(guān)鍵作用。其廣泛的遺傳多樣性和代謝多樣性使它們能夠在多種棲息地中繁衍生息,甚至在高溫度和高鹽度環(huán)境中也能生存。許多微藻種類富含蛋白質(zhì)和脂質(zhì),包括多不飽和脂肪酸(PUFAs),如二十二碳六烯酸(DHA)和二十碳五烯酸(EPA),以及類胡蘿卜素及其衍生物(如蝦青素和葉黃素)。它們還產(chǎn)生其他生物活性化合物(如硫酸化多糖和花色素)(Gupta等人,2023年)。這些特性使得微藻在食品、制藥、生物能源、增強免疫功能、預(yù)防心血管疾病和生物柴油生產(chǎn)等領(lǐng)域得到廣泛應(yīng)用。微藻是水生環(huán)境中的主要初級生產(chǎn)者,能夠快速合成PUFAs,尤其是必需脂肪酸EPA和DHA。
        微藻中的DHA是一種重要的多不飽和脂肪酸(PUFA),具有顯著的抗炎和免疫調(diào)節(jié)作用。它能激活抗炎途徑,增強肝臟保護,并支持免疫細胞的活力。這些特性使其在緩解類風濕性關(guān)節(jié)炎等炎癥性疾病方面表現(xiàn)出效。此外,DHA通過改善血脂和血糖水平、減少高脂飲食引起的脂肪積累以及提高HDL水平來調(diào)節(jié)代謝,從而有助于減輕心血管疾病和肥胖相關(guān)并發(fā)癥。角鯊烯在提高低氧耐受性方面也顯示出潛力,成為新的研究方向(Khan等人,2021年)。除了DHA,微藻脂質(zhì)還含有其他有價值的化合物,如角鯊烯,這是一種具有抗炎、抗腫瘤和心臟保護特性的三萜類化合物。角鯊烯在提高低氧耐受性方面具有潛力,成為新的研究焦點。其他PUFAs,如亞油酸和花生四烯酸,對多種健康問題具有治療潛力,包括高血壓、呼吸系統(tǒng)疾病、消化性潰瘍和精神分裂癥。這種多功能性使得微藻脂質(zhì)成為有價值的營養(yǎng)補充劑和健康產(chǎn)品成分。
        與傳統(tǒng)魚類來源相比,微藻在生產(chǎn)PUFA方面具有多個優(yōu)勢,包括營養(yǎng)需求簡單、生長速度快、污染物含量低且無魚腥味(Mao等人,2022年)。微藻油的高營養(yǎng)價值和安全性已通過毒理學(xué)和遺傳毒性評估得到證實,支持其在食品和營養(yǎng)補充劑中的廣泛應(yīng)用。此外,微藻DHA的理化性質(zhì)符合國家標準,使其成為可靠的原材料(Chen等人,2016年)。
        微藻營養(yǎng)價值極高,含有大量的蛋白質(zhì)、氨基酸和碳水化合物。某些種類,如小球藻(Chlorella)和鹽生杜氏藻(Dunaliella salina),其碳水化合物含量超過干重的40%。在蛋白質(zhì)方面,紅藻和螺旋藻(Spirulina)的含量分別高達60%和60~71%,遠高于大豆(38%)和雞蛋(13.2%)(Churchward-Venne等人,2017年)。微藻蛋白質(zhì)的優(yōu)勢不僅在于其含量,還在于其平衡的氨基酸組成。微藻可以合成20種不同的氨基酸,其中包括8種必需氨基酸。例如,小球藻中的必需氨基酸濃度符合世界衛(wèi)生組織(WHO)和聯(lián)合國糧食及農(nóng)業(yè)組織(FAO)的標準。因此,微藻蛋白被認為是一種理想的可持續(xù)蛋白質(zhì)來源,并已廣泛應(yīng)用于食品配方和動物飼料中。
        微藻蛋白不僅是一種極其營養(yǎng)豐富的食物,還因其多樣的生物活性而備受關(guān)注。微藻蛋白及其水解物或肽具有顯著的抗氧化、抗癌、降壓、抗炎和抗動脈粥樣硬化作用。這些生物活性歸因于酶蛋白、肽和蛋白質(zhì)復(fù)合物的參與(Wang等人,2022b)。藻膽蛋白包括藻紅蛋白、藻紅藍蛋白、藻藍蛋白(PC)和異藻藍蛋白(APC)。
        來自微藻的天然色素,如葉綠素、類胡蘿卜素、蝦青素和巖藻黃質(zhì),在光合作用中起著重要作用,并具有出色的抗氧化、抗炎和抗菌特性(Aditi等人,2025年)。因此,這些色素被視為食品工業(yè)中極具價值的天然功能性成分。與合成色素相比,微藻衍生的色素更符合“天然、健康和可持續(xù)”的食品趨勢。它們是人工染料的優(yōu)秀替代品,同時還能用于營養(yǎng)強化和功能性食品的制備(Siladji等人,2024年)。這些色素主要由類胡蘿卜素、藻膽素、葉綠素和巖藻黃質(zhì)組成。除了在藻類光合作用中的重要作用外,它們還表現(xiàn)出顯著的抗氧化、抗炎和抗菌生物活性。它們因能夠清除自由基(自由基會損害細胞并增強免疫功能)而受到深入研究。
        微藻中的葉綠素和類胡蘿卜素是天然存在的化合物,在許多領(lǐng)域都有廣泛應(yīng)用。這些色素在光合作用中捕獲光能,支持微藻生長。微藻繁殖迅速,所需資源少,使得類胡蘿卜素成為具有可持續(xù)性的寶貴生物活性物質(zhì)。因此,它們被認為是合成染料和動物來源化合物的可持續(xù)替代品。葉綠素是光合作用中的主要色素。除了吸收和轉(zhuǎn)化光能外,它還具有抗氧化、抗炎和調(diào)節(jié)腸道功能的生理益處。微藻中的葉綠素含量通常占其體重的0.5%到1.5%,而普通小球藻(Chlorella vulgaris)中的葉綠素含量可高達7%(Megawati等人,2022年)。此外,巖藻黃質(zhì)是一種典型的褐藻類胡蘿卜素,因其特殊的分子結(jié)構(gòu)而具有多種健康益處,如抗腫瘤、抗肥胖和調(diào)節(jié)血糖的作用。
        近年來,基因工程、代謝調(diào)控和人工智能算法的進步使得對微藻中生物活性化合物合成途徑的研究更加深入。這些發(fā)展顯著提高了生物活性化合物的產(chǎn)量。這些技術(shù)的應(yīng)用不僅擴展了微藻生物活性物質(zhì)在食品、醫(yī)藥和生物能源領(lǐng)域的應(yīng)用,還為生物資源的可持續(xù)開發(fā)提供了新方法。本文綜述了CRISPR/Cas9技術(shù)在微藻中增強生物活性化合物生物合成和調(diào)控的應(yīng)用。

        CRISPR/Cas9基因編輯系統(tǒng)概述

        Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats/CRISPR-associated protein 9(CRISPR/Cas9)是一種開創(chuàng)性的基因組編輯技術(shù),對基因工程領(lǐng)域產(chǎn)生了重大影響。該技術(shù)屬于第三代位點特異性基因組編輯技術(shù),前兩代分別為鋅指核酸酶(ZFNs)和轉(zhuǎn)錄激活因子樣效應(yīng)核酸酶(TALENs)。ZFN和TALEN技術(shù)都較為繁瑣且成本較高,因為它們依賴于

        微藻中基因編輯的應(yīng)用實踐和策略

        微藻是單細胞光合生物,含有多種生物活性化合物,包括脂質(zhì)、蛋白質(zhì)和色素等。由于其豐富的代謝特性和獨特的生理特性,微藻在可再生能源、生物醫(yī)學(xué)、食品工業(yè)和環(huán)境監(jiān)測等領(lǐng)域具有廣泛的應(yīng)用價值,對科學(xué)研究和發(fā)展具有重要意義(Poulhazan等人,2021年)

        在微藻中實施CRISPR/Cas9的挑戰(zhàn)和潛在策略

        在合成生物學(xué)時代,藻類基因工程有望生產(chǎn)新的代謝產(chǎn)物,包括色素、脂質(zhì)、蛋白質(zhì)和多糖。CRISPR/Cas9系統(tǒng)已成為基因組編輯的基石工具。然而,在微藻中成功應(yīng)用CRISPR/Cas9面臨一些挑戰(zhàn),如編輯效率低、轉(zhuǎn)化方法有限以及需要精確的調(diào)控機制。克服這些挑戰(zhàn)將

        結(jié)論

        CRISPR/Cas9技術(shù)在微藻中的潛在應(yīng)用將為生物活性化合物的可持續(xù)代謝工程開辟新視野,不僅適用于生物燃料,也適用于制藥和高價值營養(yǎng)制品。盡管在模式藻類(如C. reinhardtiiP. tricornutum)中已經(jīng)取得了顯著進展,但該技術(shù)在其他藻類中的應(yīng)用仍較為有限
        未引用的參考文獻
        Jeong等人,2023年
        Kumar等人,2020年
        Lyon和Mock,2014年

        利益沖突聲明

        作者聲明本研究是在沒有任何可能被視為潛在利益沖突的商業(yè)或財務(wù)關(guān)系的情況下進行的。

        致謝

        該項目由FuXiaQuan國家自主創(chuàng)新示范區(qū)協(xié)同創(chuàng)新平臺項目資助(2023FX0001)。圖表使用Biorender軟件制作。
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