Orf病毒是一種全球分布的動(dòng)物源性病原體，主要感染綿羊和山羊，盡管偶爾也有人類(lèi)感染的報(bào)告。在這項(xiàng)研究中，我們報(bào)告了一例在中國(guó)發(fā)生的罕見(jiàn)的人類(lèi)Orf病毒感染病例。一名66歲的牧羊人來(lái)自中國(guó)山東省濟(jì)寧市，他因右臂、左腕和下巴在過(guò)去的8天內(nèi)出現(xiàn)多個(gè)膿性結(jié)節(jié)而就醫(yī)。入院前約20天，他曾直接接觸過(guò)受感染的綿羊。通過(guò)擴(kuò)增和分析病毒的B2L基因，確診為Orf病毒感染，該基因與俄羅斯的一種Orf病毒株的核苷酸同源性最高（99.46%），但與其他中國(guó)的Orf病毒株相比差異較大。F1L基因也被檢測(cè)到，盡管其與中國(guó)病毒株的核苷酸同源性較低（98.71%）。我們的研究結(jié)果表明，中國(guó)的臨床醫(yī)生需要提高對(duì)人類(lèi)Orf感染的警惕性，以確保準(zhǔn)確及時(shí)的診斷，尤其是在該病毒流行地區(qū)。

引言

Orf病毒（ORFV）是一種屬于痘病毒科（Poxviridae）副痘病毒屬（Parapoxvirus）的雙鏈DNA病毒，是導(dǎo)致綿羊和山羊傳染性丘疹性皮炎的病原體（Chen等人，2017）。這種病毒在全球范圍內(nèi)分布，幾乎存在于所有養(yǎng)羊和養(yǎng)山羊的國(guó)家。盡管它在畜牧業(yè)中具有顯著的經(jīng)濟(jì)影響，但傳染性丘疹性皮炎是一種自限性疾病，主要表現(xiàn)為受感染動(dòng)物嘴唇、舌頭和鼻孔周?chē)�的病變�?a>Chi等人，2013）。成年動(dòng)物的癥狀通常在1個(gè)月內(nèi)消退，但在幼羊中可能會(huì)致命（Ma等人，2022）。

作為一種動(dòng)物源性病原體，Orf病毒可以通過(guò)接觸受感染的動(dòng)物或受污染的動(dòng)物產(chǎn)品輕易傳播給人類(lèi)（Mungmunpuntipantipantip和Wiwanitkit，2024）。人類(lèi)感染的臨床表現(xiàn)從輕微的丘疹到嚴(yán)重的膿皰性皮炎不等（Santiago等人，2019）。雖然人與人之間的傳播非常罕見(jiàn)，但已有相關(guān)報(bào)道（Turk等人，2014；Rajkomar等人，2016）。Orf病毒的基因組長(zhǎng)度約為138 kb，編碼132個(gè)基因。Orf病毒感染的分子診斷主要基于包膜基因（B2L）的擴(kuò)增和分析（Gelaye等人，2016），該基因編碼具有高度保守性的免疫蛋白。此外，F(xiàn)1L和Vir基因也被用于Orf病毒的系統(tǒng)發(fā)育分析，有助于了解其遺傳多樣性和進(jìn)化模式。

在中國(guó)，許多省份（包括福建、陜西、云南和黑龍江）都報(bào)告過(guò)綿羊和山羊的Orf病毒感染病例（Chi等人，2015；Yu等人，2017）。然而，人類(lèi)感染病例較為罕見(jiàn)，近年來(lái)僅偶爾有報(bào)道（Liu等人，2023；Yu等人，2023）。2024年，我們?cè)谥袊?guó)發(fā)現(xiàn)了一例66歲男性的Orf病毒感染病例，他表現(xiàn)為手臂、手腕和下巴出現(xiàn)結(jié)節(jié)。他曾經(jīng)直接接觸過(guò)患病的綿羊，并通過(guò)分子診斷確診為Orf病毒感染。

病例介紹

2024年8月，一名66歲的牧羊人來(lái)到中國(guó)山東省濟(jì)寧市醫(yī)院就診，他的右臂、左腕和下巴在過(guò)去的8天內(nèi)出現(xiàn)了多個(gè)膿性結(jié)節(jié)（圖1A、B）。這些結(jié)節(jié)無(wú)痛，部分伴有黃色滲出物（圖1A）。患者總體健康狀況良好，沒(méi)有發(fā)燒、頭痛、腹瀉、疲勞或食欲減退等癥狀。所有其他常規(guī)檢查結(jié)果均正常。最初懷疑他可能感染了牛痘病毒或皰疹病毒，但實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)結(jié)果均為陰性。醫(yī)生給他開(kāi)了口服阿昔洛韋和倍他米松，并外用小檗堿粉和Pevisone乳膏，但癥狀沒(méi)有明顯改善。

圖1。圖片展示了患者的感染情況：右臂（A）和左腕（B）上的膿性結(jié)節(jié)。

考慮到患者與綿羊的接觸史，懷疑其可能感染了Orf病毒。為了確認(rèn)這一點(diǎn)，研究人員收集了膿性液體樣本，并將其儲(chǔ)存在干冰中，送往國(guó)家傳染病控制與預(yù)防研究所進(jìn)行檢測(cè)。使用Qiagen公司的QIAamp DNA Blood Mini試劑盒從樣本中提取DNA，然后通過(guò)嵌套PCR方法檢測(cè)Orf病毒的存在（Abrah?o等人，2009）。PCR反應(yīng)在Sensoquest公司的PCR System LabCycler儀器上進(jìn)行。電泳后，觀察到一條獨(dú)特且特異的條帶（約600 bp），隨后對(duì)PCR產(chǎn)物進(jìn)行測(cè)序。BLASTN分析顯示，該序列與俄羅斯圖瓦共和國(guó)的Orf病毒株Erzinsky（KY652170.1）的同源性最高（99.46%），與蒙古的Orf病毒株ORFV/Mon 1/2018/JVPA/Mongolia（LC516489.1）的同源性為98.75%，與其他中國(guó)的Orf病毒株的同源性低于98.39%。利用PhyML 3.0軟件構(gòu)建的系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)（Guindon和Gascuel，2003）顯示，該病毒株（Orf病毒JN8/Shandong/China/2024）與Erzinsky病毒株關(guān)系密切，兩者構(gòu)成一個(gè)相對(duì)獨(dú)立的支系。為進(jìn)一步確認(rèn)病原體身份，還擴(kuò)增并測(cè)序了部分F1L基因（也稱為059基因，長(zhǎng)度為621 bp）（Abdullah等人，2015）。BLASTN分析顯示，該序列與中國(guó)吉林省的Orf病毒株CL24（PV126639.2）的同源性最高（98.71%）。在系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)（圖2）中，該病毒株也代表一個(gè)相對(duì)獨(dú)立的支系。此外，還測(cè)序了病毒干擾素抵抗基因（Vir）的部分序列（436 bp），結(jié)果顯示其與中國(guó)河南省（KY053526.1）和新疆自治區(qū)（JN565695.1）的Orf病毒株的同源性為99.08%（補(bǔ)充圖S1）。

圖2。基于Orf病毒B2L和F1L基因序列構(gòu)建的系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)。系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)使用PhyML3.0軟件和GTR模型通過(guò)最大似然（ML）方法構(gòu)建，并使用FigTree v1.4.3軟件進(jìn)行編輯。每個(gè)分支的置信度通過(guò)100次重復(fù)的自助法（bootstrapping）進(jìn)行驗(yàn)證。選擇與中國(guó)當(dāng)前病毒株關(guān)系最密切、最具代表性的病毒株作為參考序列。

隨后進(jìn)行了流行病學(xué)調(diào)查以確定感染源。患者負(fù)責(zé)照料24只綿羊。入院前約20天，大多數(shù)綿羊（約20只）的口腔周?chē)�出現(xiàn)了化膿和丘疹性病變。他在照料綿羊時(shí)接觸了這些病變部位。患者表示在發(fā)病前沒(méi)有接觸過(guò)其他綿羊或可疑動(dòng)物。患者就診時(shí)，他所照料的綿羊已經(jīng)康復(fù)。通過(guò)嵌套PCR檢測(cè)，未在綿羊的鼻拭子（6個(gè)樣本）和羊圈環(huán)境樣本（4個(gè)樣本，包含糞便和泥土混合物）中檢測(cè)到Orf病毒。盡管如此，可以推斷患者是從患病的綿羊那里感染的。患者聲稱這些綿羊是從十多年前從鄰近縣的市場(chǎng)購(gòu)買(mǎi)的，它們?cè)谌︷B(yǎng)環(huán)境中飼養(yǎng)，近期未與其他動(dòng)物接觸。根據(jù)這些信息，推測(cè)部分綿羊可能持續(xù)感染了Orf病毒。

在確診為Orf病毒感染后，停止使用阿昔洛韋和倍他米松，改用硫酸頭孢喹諾酮和氟苯尼考治療以防止繼發(fā)細(xì)菌感染。同時(shí)使用草藥膏作為輔助治療。一個(gè)月后，膿性結(jié)節(jié)消失，皮膚逐漸恢復(fù)正常。

討論

Orf病毒是一種全球分布的動(dòng)物源性病原體，幾乎在所有大陸都有報(bào)道。本報(bào)告描述了中國(guó)山東省的一例罕見(jiàn)人類(lèi)感染病例。根據(jù)觀察結(jié)果，我們認(rèn)為Orf病毒感染在中國(guó)可能較為普遍，尤其是對(duì)畜牧業(yè)工人來(lái)說(shuō)可能構(gòu)成職業(yè)風(fēng)險(xiǎn)。值得注意的是，由于癥狀相對(duì)較輕，這類(lèi)病例容易被忽視或誤診。

令人驚訝的是，從患者樣本中分離出的B2L基因序列與2015年在俄羅斯圖瓦共和國(guó)發(fā)現(xiàn)的一種Orf病毒株的同源性非常高（99.46%），而圖瓦共和國(guó)距離濟(jì)寧市超過(guò)2000公里。相比之下，該序列與中國(guó)其他Orf病毒株差異較大。雖然Vir基因序列與中國(guó)河南和新疆的病毒株高度同源，但B2L和F1L基因與中國(guó)河南的病毒株差異顯著（圖1）。基于這些遺傳和流行病學(xué)調(diào)查，很難確定該病毒株的來(lái)源，但有兩種可能性：1）該病毒株可能是中國(guó)本土未報(bào)道的病毒株；2）該病毒株可能是通過(guò)早期牲畜貿(mào)易從其他國(guó)家（俄羅斯或鄰近的蒙古）引入的。然而，目前尚無(wú)確鑿證據(jù)支持這一推測(cè)，需要進(jìn)一步研究。

有報(bào)道稱，Orf病毒感染在動(dòng)物中可能表現(xiàn)為持續(xù)性感染，且臨床癥狀不明顯（Nettleton等人，1996）。這可能導(dǎo)致由于病毒載量低而難以檢測(cè)到所有無(wú)癥狀的感染者。因此，應(yīng)加強(qiáng)對(duì)這一風(fēng)險(xiǎn)的防控。此外，如果出現(xiàn)類(lèi)似癥狀的患者有接觸動(dòng)物的歷史，臨床醫(yī)生應(yīng)考慮Orf病毒感染的可能性。

本病例報(bào)告也存在一些局限性：首先，未分離出Orf病毒株，也未對(duì)其基因組進(jìn)行測(cè)序，因此對(duì)其起源的推測(cè)僅基于部分已知基因的DNA序列；其次，未在綿羊或環(huán)境樣本中檢測(cè)到Orf病毒，證據(jù)鏈不完整；第三，綿羊的來(lái)源國(guó)家或地區(qū)也不明確。總之，我們未能獲得關(guān)于該病毒分子特征和流行病學(xué)特征的充分證據(jù)。因此，需要進(jìn)一步研究以更詳細(xì)地了解中國(guó)人類(lèi)Orf病毒感染的流行情況。