《Journal of Lipid Research》：Analytical Validation of Monoclonal Antibody-Based ELISA Methods for OxPL-apoB and OxPL-apo(a)
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本研究針對氧化磷脂（OxPL）作為心血管疾病生物標志物缺乏標準化檢測方法的瓶頸，首次完成了符合CLIA標準的OxPL-apoB與OxPL-apo(a)化學發光ELISA方法的全面分析驗證。研究通過單克隆抗體MB47/LPA4捕獲和E06檢測技術，證實兩種檢測方法在1.48-148.48 nmol/L范圍內具有優異精密度（CV≤20%）和基質等效性，為Lp(a)靶向治療研究提供了可靠工具。該成果實現了OxPL檢測從科研向臨床應用的跨越，對心血管風險分層和藥物研發具有重要意義。
在心血管疾病研究領域，氧化磷脂（Oxidized Phospholipids, OxPL）作為反映脂質氧化損傷程度的關鍵生物標志物，近年來受到廣泛關注。這些活性脂質分子主要通過與載脂蛋白B-100（apoB）和載脂蛋白(a)（apo(a)）結合形成OxPL-apoB和OxPL-apo(a)復合物，在動脈粥樣硬化斑塊形成、炎癥反應及血栓形成過程中發揮重要作用。特別是與脂蛋白(a)（Lp(a)）結合的OxPL-apo(a)，因其與心血管事件、外周動脈疾病和鈣化性主動脈瓣狹窄的顯著相關性，已成為預測心血管風險的重要指標。
然而，盡管OxPL-apoB和OxPL-apo(a)在流行病學和干預性研究中展現出巨大潛力，其檢測長期局限于科研用途的實驗室方法，缺乏符合臨床實驗室改進修正案（CLIA）標準的標準化驗證。這一局限性嚴重阻礙了這些生物標志物在臨床實踐和大規模臨床試驗中的應用，特別是在當前Lp(a)靶向治療藥物（如pelacarsen、olpasiran等）快速發展的背景下，迫切需要經過嚴格驗證的檢測方法來實現治療效果的準確評估。
為解決這一關鍵技術瓶頸，由Santica Marcovina、Sotirios Tsimikas等研究人員組成的團隊在《Journal of Lipid Research》上發表了題為"Analytical Validation of Monoclonal Antibody-Based ELISA Methods for OxPL-apoB and OxPL-apo(a)"的研究論文，首次報道了符合CLIA標準的OxPL-apoB和OxPL-apo(a)化學發光ELISA檢測方法的全面分析驗證。
研究人員采用的關鍵技術方法主要包括：基于單克隆抗體的雙抗體夾心ELISA技術平臺，其中OxPL-apoB檢測使用MB47抗體捕獲所有含apoB-100的脂蛋白顆粒，OxPL-apo(a)檢測使用LPA4抗體特異性捕獲含apo(a)的顆粒，兩者均采用biotin-E06 IgM抗體檢測氧化磷脂。研究使用40名健康志愿者的血清和EDTA血漿樣本，按照CLSI標準系統評估了檢測的精密度、線性范圍、定量限、準確度、基質等效性和穩定性等參數。
研究結果
精密度
OxPL-apoB檢測的批內精密度（CV）為4.7%-9.7%，總精密度為15.8%-20.0%；OxPL-apo(a)檢測的批內精密度為3.8%-8.2%，總精密度為15.0%-19.8%，均滿足預設的接受標準（≤20%）。
分析測量范圍
兩種檢測方法在0.0297-2.970 nmol/L PC-OxPL范圍內呈現良好線性，考慮樣本1:50的稀釋比例，實際分析測量范圍（AMR）為1.48-148.48 nmol/L PC-OxPL。功能性的定量下限（LLOQ）和定量上限（ULOQ）分別為1.48 nmol/L和148.48 nmol/L。
準確度與基質等效性
加標回收實驗顯示，OxPL-apoB的回收率為80.4%-106.5%，OxPL-apo(a)為91.5%-113.4%。血清與EDTA血漿樣本的比較顯示，兩種基質間的偏差極�。∣xPL-apoB為-2.43%，OxPL-apo(a)為1.01%），證明血清和血漿在分析上是等效的。
健康人群參考范圍
在40名健康正常血脂志愿者中，OxPL-apoB水平范圍為<1.48-25.23 nmol/L（均值4.18，中位數1.79 nmol/L），OxPL-apo(a)水平范圍為<1.48-126.94 nmol/L（均值31.04，中位數6.90 nmol/L）。OxPL-apo(a)與Lp(a)濃度呈強相關性（R2=0.82），證實Lp(a)是血漿中OxPL的主要載體。
穩定性評估
樣本在室溫（18-25°C）下穩定4小時，2-8°C下穩定24小時。長期保存方面，-20°C可穩定6個月，而-70°C下至少穩定12個月。凍融穩定性顯示，-70°C保存的樣本可耐受2次凍融循環。
研究結論與意義
本研究成功完成了首個符合CLIA標準的OxPL-apoB和OxPL-apo(a)化學發光ELISA方法的全面分析驗證，標志著這些生物標志物的檢測正式從科研領域進入標準化臨床實驗室應用階段。驗證結果表明，兩種檢測方法均具有優異的分析性能，包括寬動態范圍、良好的精密度和準確度、血清/血漿基質等效性以及明確的穩定性特征。
從病理生理機制角度看，OxPL-apoB反映了所有含apoB-100脂蛋白顆粒的氧化負擔，是系統性氧化脂質損傷的替代標志物；而OxPL-apo(a)則特異性反映Lp(a)顆粒的氧化修飾程度，更能體現Lp(a)的致動脈粥樣硬化潛力。兩種檢測結果的差異不僅體現了方法學的特異性，也揭示了OxPL在不同脂蛋白顆粒中分布的內在規律：Lp(a)由于其獨特的結構特征（apo(a)KIV10結構域的賴氨酸結合域可共價結合OxPL），成為血漿中OxPL的主要載體，這解釋了OxPL-apo(a)水平普遍高于OxPL-apoB的觀察結果。
這些經過驗證的檢測方法為心血管風險分層、治療效果評估和藥物開發提供了重要工具。特別是在當前Lp(a)靶向治療（如反義寡核苷酸、小干擾RNA、口服Lp(a)組裝抑制劑等）快速發展的背景下，OxPL-apoB和OxPL-apo(a)可作為中間生物標志物，在心血管終點事件數據獲得之前，為藥物的生物活性和作用機制提供早期證據。此外，這些檢測還有助于理解OxPL在動脈粥樣硬化、瓣膜鈣化等病理過程中的具體作用機制，為開發新的治療策略提供思路。
該研究的成功實施打破了OxPL生物標志物臨床應用的技術壁壘，為大規模多中心臨床試驗的開展奠定了基礎，對推動心血管疾病精準醫療發展具有重要意義。隨著Lp(a)靶向治療時代的到來，這些標準化檢測方法有望在風險評估、治療決策和療效監測中發揮越來越重要的作用。
