《Frontiers in Immunology》：Endogenous CD5L controls the metabolic and inflammatory state of human macrophages
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本研究揭示了內(nèi)源性CD5L通過(guò)重塑巨噬細(xì)胞脂質(zhì)組、調(diào)控核受體RORα活性，進(jìn)而影響NF-κB信號(hào)通路及炎癥因子表達(dá)的分子機(jī)制。通過(guò)CRISPR/Cas9技術(shù)構(gòu)建CD5L基因敲除的THP-1巨噬細(xì)胞模型，結(jié)合轉(zhuǎn)錄組與脂質(zhì)組學(xué)分析，發(fā)現(xiàn)CD5L缺失導(dǎo)致炎癥相關(guān)基因（如TNF、IL-1β）表達(dá)顯著下調(diào)，并誘導(dǎo)抗炎分子CD52上調(diào)。該研究為代謝性炎癥疾�。ㄈ鐒�(dòng)脈粥樣硬化）的靶向治療提供了新視角。
引言
先天免疫信號(hào)通過(guò)感知細(xì)胞代謝變化應(yīng)對(duì)病原體威脅。膽固醇代謝物可作為肝X受體（LXR）等核受體的配體，連接膽固醇穩(wěn)態(tài)與炎癥反應(yīng)。CD5L（又稱AIM或Spα）作為清道夫受體樣分子，通過(guò)調(diào)節(jié)細(xì)胞代謝參與炎癥調(diào)控，但其在人巨噬細(xì)胞中的內(nèi)源性功能尚不明確。本研究通過(guò)敲除THP-1單核細(xì)胞系中的CD5L基因，探討其對(duì)巨噬細(xì)胞炎癥狀態(tài)的影響。
結(jié)果
CD5L調(diào)控THP-1細(xì)胞的炎癥狀態(tài)
在分化后的巨噬細(xì)胞樣CD5L敲除（CD5L-KO）細(xì)胞中，基礎(chǔ)狀態(tài)下NF-κB調(diào)控基因（如TNF、IL-1β）表達(dá)顯著降低。盡管LPS刺激后誘導(dǎo)幅度與對(duì)照組相似，但突變細(xì)胞中炎癥因子mRNA水平仍低于對(duì)照組。ELISA檢測(cè)進(jìn)一步證實(shí)CD5L-KO細(xì)胞在LPS刺激后3小時(shí)和6小時(shí)分泌的IL-6蛋白水平顯著降低（圖2D），支持CD5L在人類巨噬細(xì)胞中發(fā)揮促炎作用。
CD5L缺失重塑巨噬細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組
RNA-seq分析顯示，CD5L敲除導(dǎo)致1,165個(gè)基因表達(dá)差異（FDR<0.05），其中879個(gè)基因下調(diào)。KEGG富集分析表明，TNF信號(hào)通路、NF-κB通路等炎癥相關(guān)通路顯著受影響（圖3C）。例如，TNF通路中28個(gè)基因表達(dá)下調(diào)，僅FAS（TNFRSF6）上調(diào)（圖4），提示CD5L缺失使巨噬細(xì)胞進(jìn)入持續(xù)性低炎癥狀態(tài)。
CD5L介導(dǎo)脂質(zhì)組重塑
UPLC-ESI-TOF質(zhì)譜分析顯示，CD5L-KO細(xì)胞中飽和脂肪酸（SFA）側(cè)鏈比例增加，高度多不飽和脂肪酸（PUFA）水平上升（圖5B、5C）。Filipin染色顯示突變細(xì)胞內(nèi)游離膽固醇積累增加（圖5D），表明CD5L參與巨噬細(xì)胞脂質(zhì)組成調(diào)控。
CD5L不通過(guò)脂肪酸合酶（FASN）發(fā)揮作用
盡管小鼠研究中CD5L通過(guò)抑制FASN調(diào)控脂代謝，但在人巨噬細(xì)胞中，CD5L敲除并未引起FASN活性顯著變化（圖6），提示其脂質(zhì)重塑功能可能存在其他機(jī)制。
RORα位于CD5L信號(hào)下游
在CD5L/RORα雙敲除（DKO）細(xì)胞中，炎癥因子表達(dá)水平與RORα單敲除細(xì)胞相似（圖2A–2D），且RNA-seq聚類分析發(fā)現(xiàn)CD5L與RORα缺失細(xì)胞的基因表達(dá)呈反向調(diào)控（圖7A–7E）。這些結(jié)果支持CD5L可能通過(guò)調(diào)節(jié)RORα配體可用性影響炎癥信號(hào)，但ROR反應(yīng)元件（RORE）報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)未檢測(cè)到CD5L依賴的轉(zhuǎn)錄活性變化，需進(jìn)一步驗(yàn)證二者直接關(guān)聯(lián)。
CD5L調(diào)控單細(xì)胞-基質(zhì)相互作用相關(guān)因子
在未分化的單核細(xì)胞中，CD5L敲除導(dǎo)致基質(zhì)金屬蛋白酶MMP-2、MMP-9表達(dá)下調(diào)，神經(jīng)細(xì)胞黏附分子NCAM-1上調(diào)（圖8B）。這些分子參與單核細(xì)胞遷移與動(dòng)脈粥樣硬化進(jìn)程，提示CD5L可能通過(guò)調(diào)控細(xì)胞遷移影響疾病發(fā)展。
CD5L缺失誘導(dǎo)抗炎分子CD52
CD5L敲除使CD52在未分化和分化細(xì)胞中分別上調(diào)3.6倍和6.34倍（圖8C）。Western blot驗(yàn)證其蛋白水平增加（圖8D）。CD52可抑制TLR介導(dǎo)的NF-κB活化并誘導(dǎo)凋亡，可能是CD5L調(diào)控炎癥的新介質(zhì)。
討論
本研究證實(shí)內(nèi)源性CD5L是維持人巨噬細(xì)胞基礎(chǔ)炎癥狀態(tài)的關(guān)鍵因子。其缺失導(dǎo)致脂質(zhì)組重塑、炎癥通路抑制及抗炎分子CD52上調(diào)。盡管CD5L與RORα的遺傳學(xué)關(guān)系支持二者功能關(guān)聯(lián)，但直接調(diào)控機(jī)制仍需深入探索。此外，CD5L對(duì)單核細(xì)胞遷移相關(guān)分子（如MMP-2、MMP-9、NCAM-1）的調(diào)控提示其在動(dòng)脈粥樣硬化中的多效性作用。未來(lái)需在原代細(xì)胞模型（如BLaER1）中驗(yàn)證CD5L的功能，并區(qū)分其內(nèi)源性分泌與外源性補(bǔ)充的效應(yīng)。
