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本研究通過構建線粒體置換型FVB/N-mt129S6/SvEvTac小鼠（FVB/N核基因組+129S6/SvEvTac線粒體基因組），探討了線粒體基因變異（如mt-Atp8*D5Y）對己烯雌酚（DES）誘導子宮內膜癌的影響。結果表明，線粒體置換雖未改變癌癥發生率，但顯著提高了腫瘤惡性程度；同時，該模型成功解決了FVB/N背景難以獲得生殖系傳遞胚胎干細胞（ES細胞）的難題，為癌癥機制研究和基因編輯模型構建提供了高效平臺。
研究背景與目的
子宮內膜癌是全球女性第六大常見惡性腫瘤，其發生與早期接觸雌激素類環境干擾物（如己烯雌酚DES）密切相關。FVB/N小鼠因其高生殖效率和易感性，成為研究DES誘導子宮內膜癌的常用模型。該品系攜帶線粒體基因mt-Atp8的多態性變異（mt-Atp8*D5Y），導致線粒體活性氧（ROS）水平升高。研究團隊假設該變異是FVB/N小鼠子宮內膜癌加速發展的關鍵因素，并通過構建線粒體置換型小鼠（FVB/N-mt129）進行驗證。
模型構建與驗證
通過將FVB/N雄性小鼠與129S6/SvEvTac雌性小鼠雜交，并經17代回交，獲得核基因組為FVB/N、線粒體基因組為129S6/SvEvTac的conplastic小鼠品系（FVB/N-mt129）。全基因組SNP掃描證實其核基因組與FVB/N一致性達99.1%，線粒體基因組測序顯示129S6品系攜帶mt-Atp6的良性錯義突變（mt-ATP6*N183S），不影響線粒體功能。
胚胎干細胞與基因編輯應用
FVB/N背景傳統上難以獲得生殖系傳遞的胚胎干細胞（ES細胞）。本研究從FVB/N-mt129小鼠囊胚中成功分離ES細胞，其建系效率達29–35%。通過CRISPR/Cas9技術對ES細胞中導致白化病的TyrC突變進行修復，使用質粒或單鏈寡核苷酸（ssODN）作為修復模板，均成功獲得純合編輯克隆。編輯后的ES細胞注入C57BL/6J囊胚后，產生生殖系傳遞的嵌合體小鼠，證明該模型支持高效基因編輯和生殖系傳遞。
癌癥表型分析
對9月齡FVB/N與FVB/N-mt129小鼠的子宮組織進行病理學評估發現，兩組在基底細胞化生和鱗狀化生程度無顯著差異，但FVB/N-mt129組的子宮內膜癌發生率（98% vs. 83%）和腫瘤分級均更高（p=0.0023）。這一結果反駁了初始假設，表明FVB/N線粒體變異并非癌癥易感性的主要驅動因素，而核基因組多態性或細胞核-線粒體互作（cyto-nuclear incompatibility）可能起關鍵作用。
研究意義與展望
FVB/N-mt129小鼠模型不僅解決了FVB/N背景ES細胞建系難題，為快速生成基因修飾小鼠提供了工具，其獨特的癌癥表型也為探索線粒體與核基因互作在腫瘤發生中的作用提供了新視角。該模型有望應用于更多癌癥類型的研究，并推動基于Collaborative Cross等遺傳多樣性平臺的機制探索。
