在東亞和東南亞的亞熱帶與熱帶地區(qū)，生活著一類(lèi)頗為特別的蛙類(lèi)——琴蛙（Nidirana）。這個(gè)屬的成員因其獨(dú)特的鳴聲和行為而備受關(guān)注，但它們的分類(lèi)學(xué)歷史卻充滿(mǎn)爭(zhēng)議，曾一度被視為其他屬的亞屬或同物異名。近年來(lái)，隨著調(diào)查的深入，這個(gè)屬的“家譜”不斷被刷新，大量的隱存多樣性（cryptic diversity）被揭示出來(lái)。自2020年以來(lái)，僅在中國(guó)就描述了超過(guò)11個(gè)琴蛙新物種，彰顯了該地區(qū)兩棲動(dòng)物驚人的未知多樣性。然而，在新物種不斷涌現(xiàn)的同時(shí)，許多種類(lèi)的生物學(xué)信息，尤其是早期生活史階段的特征，卻依然是一片空白。這為物種的準(zhǔn)確鑒定、系統(tǒng)關(guān)系解析乃至制定有效的保護(hù)策略都帶來(lái)了挑戰(zhàn)。

2023年，研究者根據(jù)來(lái)自中國(guó)重慶黔江區(qū)的三只成年雄性標(biāo)本，描述了一個(gè)琴蛙新物種——重慶琴蛙（Nidirana chongqingensis）。其模式產(chǎn)地（type locality）僅限于重慶黔江。最初的描述基于雄性個(gè)體，提供了諸如體型小、指趾側(cè)腹面有溝、特定的蹼式等鑒別特征。然而，一個(gè)關(guān)鍵的短板是，該物種的雌性個(gè)體和蝌蚪形態(tài)從未被描述過(guò)。在生物學(xué)研究中，缺乏對(duì)物種生命周期中關(guān)鍵階段（如雌性和幼體）的認(rèn)識(shí)，就像拼圖缺了幾塊，使我們無(wú)法完整地理解這個(gè)物種的全貌。此外，其已知分布范圍極其有限，這限制了我們?cè)u(píng)估其種群狀況和受威脅程度的能力。這些信息的缺失，阻礙了對(duì)重慶琴蛙生物學(xué)和保育狀況的全面理解。

為了填補(bǔ)這些知識(shí)空白，一支研究團(tuán)隊(duì)在2024年至2025年間，對(duì)中國(guó)貴州省正安縣的山地環(huán)境進(jìn)行了兩棲爬行動(dòng)物調(diào)查。正是在這次調(diào)查中，他們意外地采集到了6只成體（3雄3雌）和5只蝌蚪。這些標(biāo)本在形態(tài)上初步符合重慶琴蛙的診斷特征。那么，這些來(lái)自貴州正安的蛙類(lèi)，是否真的就是遠(yuǎn)在300公里外的重慶黔江的那個(gè)物種？它們能否為科學(xué)家們補(bǔ)上雌性和蝌蚪這兩塊缺失的拼圖？這項(xiàng)研究由此展開(kāi)，并最終將成果發(fā)表在《Biodiversity Data Journal》上。

為了確認(rèn)這些新采集標(biāo)本的身份，研究人員運(yùn)用了分子生物學(xué)與形態(tài)學(xué)相結(jié)合的方法。首先，他們從肌肉組織中提取DNA，并擴(kuò)增了線(xiàn)粒體16S核糖體RNA（16S rRNA）和細(xì)胞色素c氧化酶亞基I（COI）這兩個(gè)基因片段進(jìn)行測(cè)序。通過(guò)從GenBank獲取包括重慶琴蛙模式產(chǎn)地標(biāo)本在內(nèi)的共28個(gè)琴蛙物種同源序列及2個(gè)外群（Babina holsti, Babina subaspera）序列，構(gòu)建了基于16S和COI基因聯(lián)合數(shù)據(jù)集的系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)，并計(jì)算了遺傳距離（p-distance）。其次，在形態(tài)學(xué)方面，他們使用數(shù)顯卡尺對(duì)成體進(jìn)行了包括吻肛長(zhǎng)（SVL）、頭長(zhǎng)（HL）等在內(nèi)的17項(xiàng)測(cè)量。對(duì)于蝌蚪，則利用ImageJ軟件從其比例照片上測(cè)量了包括全長(zhǎng)（TOL）、體長(zhǎng)（SVL）、尾長(zhǎng)（TL）等在內(nèi)的14項(xiàng)指標(biāo)，并根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)手冊(cè)對(duì)蝌蚪分期和口部形態(tài)進(jìn)行描述和記錄。所有標(biāo)本均保存于茅臺(tái)學(xué)院資源與環(huán)境學(xué)院。

基于16S和COI基因構(gòu)建的系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)顯示，來(lái)自貴州正安的5個(gè)樣本與來(lái)自模式產(chǎn)地（重慶黔江）的3個(gè)重慶琴蛙樣本共同形成了一個(gè)高支持度的單系群。基于COI基因，貴州樣本與模式產(chǎn)地樣本之間的未校正p-距離僅為0.0–0.4%，而與其他琴蛙物種的距離為3.7–13.8%。基于16S基因的結(jié)果類(lèi)似，貴州樣本與模式產(chǎn)地樣本的距離為0.0–0.5%，與其他物種的距離為1.0–7.7%。這些遺傳距離值遠(yuǎn)小于琴蛙屬內(nèi)物種間的典型分化閾值，從分子層面強(qiáng)有力地證實(shí)了貴州正安的種群即為重慶琴蛙。

研究提供了基于三只雌性標(biāo)本的首次詳細(xì)形態(tài)描述。雌性體型較雄性略大，吻肛長(zhǎng)在42.2至47.0毫米之間。身體修長(zhǎng)，皮膚相對(duì)光滑，背部有分散的小疣粒，背側(cè)褶細(xì)而明顯。喉部、胸部及四肢腹面密布深于雄性的棕褐色斑點(diǎn)，這是雌雄二態(tài)性的一個(gè)重要表現(xiàn)。趾間具中等程度的蹼。

研究首次描述了處于30期的重慶琴蛙蝌蚪。蝌蚪全長(zhǎng)在47.1至63.7毫米之間，尾長(zhǎng)約占全長(zhǎng)的63.5%至67.1%。身體呈長(zhǎng)橢圓形，口盤(pán)位于前端，呈漏斗狀。其上頜鞘中部具有缺刻。唇齒式（Labial tooth row formula, LTRF）為 I:1+1/1+1:II。生活時(shí)，背部呈黃褐色，散布不規(guī)則棕色小斑點(diǎn)，尾肌淺黃色，尾部后半部有密集的棕色斑點(diǎn)聚集。

基于對(duì)新標(biāo)本（包括雌性和雄性）的觀(guān)察，研究對(duì)重慶琴蛙的鑒別特征進(jìn)行了補(bǔ)充和修訂。修訂后的特征組合包括：體型中小型；吻棱不顯；所有指、趾具側(cè)腹面溝；雄性繁殖期在第一指背面基部具單個(gè)婚墊；雄性具內(nèi)聲囊（內(nèi)部解剖證實(shí)，修訂了原描述）；雄性腹面乳白色，雌性喉胸部密布棕色斑點(diǎn)（斑點(diǎn)較雄性更深更密）；蝌蚪（30期）全長(zhǎng)47.1–63.7毫米，口盤(pán)漏斗狀，上頜鞘有中缺刻；趾間具中等程度蹼；脛跗關(guān)節(jié)前伸達(dá)眼或鼻孔。

本研究確認(rèn)了重慶琴蛙在貴州省正安縣（28.77761° N, 107.26797° E, 海拔1326米）的存在。這將其已知分布范圍從重慶黔江區(qū)向西北擴(kuò)展了約300公里，是重要的分布新記錄。

重慶琴蛙棲息于覆蓋茂密雜草的山地沼澤、池塘和水生草地。成體隱藏于厚草叢中，雄性在夜間鳴叫。在該生境中，它與其它物種如無(wú)聲囊泛樹(shù)蛙（Polypedates megacephalus）、諸氏泛樹(shù)蛙（Zhangixalus chenfui）、沼水蛙（Hylarana guentheri）同域分布。研究還觀(guān)察到了該物種的筑巢行為，巢呈圓形。蝌蚪發(fā)現(xiàn)于池塘內(nèi)的靜水池中。

本研究通過(guò)整合分子與形態(tài)學(xué)證據(jù)，首次確認(rèn)了重慶琴蛙在貴州省正安縣的存在，將其分布范圍顯著擴(kuò)展。更重要的是，研究填補(bǔ)了該物種生物學(xué)描述上的關(guān)鍵空白，首次提供了雌性成體和蝌蚪期的詳細(xì)形態(tài)學(xué)信息，并據(jù)此修訂了其鑒別特征，特別是明確了雄性具有內(nèi)聲囊這一屬性。這些發(fā)現(xiàn)極大地完善了對(duì)重慶琴蛙這一新近描述物種的認(rèn)識(shí)，為野外準(zhǔn)確識(shí)別該物種（尤其是雌性和幼體）提供了可靠依據(jù)。新分布點(diǎn)的棲息地與模式產(chǎn)地類(lèi)似，均為清潔水體的山地沼澤，但同樣面臨著農(nóng)業(yè)生產(chǎn)污染和棲息地破碎化的潛在威脅。鑒于重慶琴蛙目前分布范圍依然狹窄，且棲息地易受干擾，本研究提供的詳實(shí)數(shù)據(jù)為其未來(lái)的保護(hù)狀況評(píng)估（例如IUCN紅色名錄評(píng)估）奠定了堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)，并強(qiáng)調(diào)了對(duì)重慶和貴州兩地池塘及農(nóng)田生態(tài)系統(tǒng)進(jìn)行保護(hù)的重要性。