胰腺導(dǎo)管腺癌（PDAC）是預(yù)后最差的惡性腫瘤之一，其獨特的腫瘤微環(huán)境（TME）以高達90%的致密纖維化基質(zhì)為特征。癌癥相關(guān)成纖維細胞（CAFs）是這些基質(zhì)的主要來源者，它們構(gòu)成了阻礙藥物滲透和免疫細胞浸潤的物理屏障，同時通過分泌細胞因子和重塑細胞外基質(zhì)（ECM）促進免疫抑制微環(huán)境的建立。代謝重編程是PDAC的標志之一，其有氧糖酵解會產(chǎn)生大量乳酸。近年來，乳酸積累誘導(dǎo)的新型翻譯后修飾——乳酸化，被發(fā)現(xiàn)與腫瘤惡性進展和免疫抑制密切相關(guān)。其中，組蛋白H3第18位賴氨酸乳酸化（H3K18la）已被證實可促進成纖維細胞活化和組織纖維化。然而，乳酸化在PDAC致密基質(zhì)微環(huán)境中的作用尚不清楚。

研究首先通過自發(fā)胰腺癌模型（KC小鼠）的空間代謝組學(xué)分析發(fā)現(xiàn)，ECM富集區(qū)域的乳酸積累顯著增強。在體外，使用外源性乳酸處理從KPC小鼠分離的CAFs，顯著促進了其膠原分泌和CAF活化標志物表達。進一步研究發(fā)現(xiàn)，乳酸處理能顯著增強CAFs的全局乳酸化水平和H3K18la蛋白水平。CUT&Tag分析顯示，在乳酸處理的CAFs中，H3K18la顯著富集于轉(zhuǎn)錄起始位點（TSS）區(qū)域，且這些區(qū)域調(diào)控的基因與ECM形成密切相關(guān)。臨床PDAC樣本分析進一步證實，CAFs中H3K18la水平與TME中基質(zhì)沉積程度呈顯著正相關(guān)。當敲低潛在乳酸化“書寫器”Ep300時，乳酸對H3K18la和膠原分泌的促進作用被削弱。這些結(jié)果表明，TME中乳酸積累上調(diào)了CAFs的H3K18la水平，從而驅(qū)動了PDAC的基質(zhì)沉積。

為了探究抑制腫瘤細胞乳酸代謝對CAFs的影響，研究者用乳酸脫氫酶A（LDHA）抑制劑草氨酸預(yù)處理KPC類器官，然后與CAFs共培養(yǎng)。結(jié)果顯示，共培養(yǎng)的CAFs中H3K18la和膠原分泌水平顯著降低。在KPC同種異體移植小鼠模型中，草氨酸治療減少了與ECM調(diào)節(jié)功能相關(guān)的Dpp4⁺CAFs亞群，并降低了其免疫抑制評分。同時，LDHA抑制導(dǎo)致了免疫抑制性調(diào)節(jié)性T細胞（Tregs）比例下降，而自然殺傷（NK）細胞和CD8⁺效應(yīng)T細胞等免疫效應(yīng)細胞比例上升。細胞通訊分析發(fā)現(xiàn)，LDHA抑制后，Dpp4⁺CAFs與效應(yīng)CD8⁺T細胞之間通過CXCL16-CXCR6軸的相互作用顯著增強，該軸被報道可促進CD8⁺T細胞在胰腺癌中的組織浸潤。更重要的是，草氨酸與抗PD-1聯(lián)合治療在KPC模型中顯著抑制了腫瘤進展并延長了小鼠生存期。

研究表明，抑癌基因p53通過調(diào)控多種代謝酶來抑制糖酵解，其在腫瘤細胞中的缺失會促進免疫抑制性TME。本研究發(fā)現(xiàn)，敲低類器官中的p53會增加培養(yǎng)基中乳酸積累，并使得共培養(yǎng)的CAFs中乳酸化水平和膠原分泌增加，提示腫瘤細胞中p53的降解通過促進乳酸產(chǎn)生，進而增強了CAFs的H3K18la和基質(zhì)沉積。

研究團隊前期工作已發(fā)現(xiàn)泛素結(jié)合酶E2T（UBE2T）可介導(dǎo)p53的K48連接泛素化及其降解。同時，p53是核糖體生物合成的負調(diào)控因子，核糖體生物合成受損會增強核糖體蛋白與MDM2（p53的主要E3泛素連接酶）的結(jié)合，從而抑制p53的泛素化降解�；�于此，研究者提出了UBE2T可能通過反饋調(diào)節(jié)機制介導(dǎo)p53降解的假設(shè)。實驗證實，UBE2T敲除會損害核糖體生物合成（表現(xiàn)為RPS6、45S和18S rRNA水平下降），并增強了核糖體蛋白L5（RPL5）與MDM2的結(jié)合。泛素化實驗顯示，UBE2T增強了MDM2介導(dǎo)的p53泛素化，而RPL5敲低則削弱了此效應(yīng)。環(huán)己酰亞胺追蹤實驗進一步確認，UBE2T以RPL5依賴的方式促進MDM2介導(dǎo)的p53降解。因此，UBE2T作為一個啟動因子，通過調(diào)節(jié)核糖體生物合成來促進MDM2介導(dǎo)的p53正反饋降解。

為了闡明UBE2T在乳酸代謝中的調(diào)控作用，研究者構(gòu)建了胰腺條件性Ube2t敲除的KC小鼠（UKC）。空間代謝組學(xué)分析顯示，UKC小鼠胰腺組織（包括癌區(qū)和ECM區(qū)）的中心碳代謝和乳酸積累均降低。有趣的是，僅在CAFs中敲除Ube2t并不能減少其乳酸產(chǎn)生和膠原分泌，但將KPC類器官更換為UBE2T缺失的UKPC類器官進行共培養(yǎng)時，CAFs的乳酸產(chǎn)生和膠原分泌則顯著降低，且用草氨酸抑制類器官的LDHA可完全消除這些差異。能量代謝組學(xué)分析揭示，UBE2T同時增強了類器官和共培養(yǎng)CAFs的糖酵解通路。免疫印跡顯示，UBE2T通過調(diào)控p53上調(diào)了腫瘤細胞中關(guān)鍵糖酵解酶（HK2, PFKFB3, PKM2, LDHA）的蛋白水平。進一步的共培養(yǎng)實驗證明，UBE2T對CAFs乳酸化、膠原分泌的調(diào)控作用依賴于其對腫瘤細胞p53的降解。臨床PDAC樣本分析也顯示，腫瘤細胞UBE2T表達與CAFs H3K18la水平及基質(zhì)沉積程度呈顯著正相關(guān)。這些發(fā)現(xiàn)表明，UBE2T-p53軸通過重編程糖酵解驅(qū)動乳酸代謝串擾，從而促進基質(zhì)沉積。

在KPC和UKPC同種異體移植模型中評估UBE2T對免疫治療的影響。結(jié)果顯示，Ube2t敲除顯著降低了腫瘤組織中CAFs的H3K18la水平和基質(zhì)沉積，并增強了CD8⁺T細胞在TME中的浸潤。當與抗PD-1抗體聯(lián)合使用時，這種促進CD8⁺T細胞浸潤的效果被進一步放大。聯(lián)合治療顯著抑制了PDAC小鼠的腫瘤生長并延長了生存期。在Panc02細胞來源的同種異體移植模型中也得到了類似結(jié)果。這些發(fā)現(xiàn)確立了UBE2T是驅(qū)動PDAC基質(zhì)增生并損害免疫治療效果的關(guān)鍵調(diào)節(jié)因子。

前期研究已鑒定出五沒食子酰葡萄糖（PGG）是UBE2T的藥理抑制劑。本研究證實，PGG處理通過抑制UBE2T，破壞了核糖體生物合成，增強了RPL5-MDM2結(jié)合，從而抑制了UBE2T驅(qū)動的p53降解正反饋環(huán)。當用PGG處理KPC類器官后，其自身及共培養(yǎng)CAFs的乳酸產(chǎn)生均下降，同時共培養(yǎng)CAFs的H3K18la水平和膠原分泌也降低。能量代謝組學(xué)分析顯示，PGG通過抑制糖酵解，顯著降低了KPC類器官和共培養(yǎng)CAFs中的糖酵解中間產(chǎn)物和乳酸水平。這表明PGG可以通過靶向UBE2T抑制糖酵解，從而減弱PDAC中乳酸介導(dǎo)的代謝串擾和基質(zhì)沉積。

體內(nèi)安全性評估顯示PGG具有良好的生物安全性。在KPC同種異體移植模型中，PGG單藥即可抑制CAFs的H3K18la和基質(zhì)沉積，并促進腫瘤內(nèi)CD8⁺T細胞浸潤，與抗PD-1聯(lián)合時效果增強。聯(lián)合治療顯著抑制了PDAC腫瘤進展，并在KPC模型和兩名患者的免疫重建人源化異種移植（PDX）模型中均帶來了顯著的生存獲益。這些結(jié)果表明，PGG作為一種有前景的免疫治療增敏劑，與抗PD-1抗體聯(lián)用具有顯著的協(xié)同效應(yīng)。

本研究揭示了UBE2T通過放大p53的正反饋降解，促進糖酵解重編程和乳酸代謝串擾，從而誘導(dǎo)CAFs乳酸化并推動PDAC致密基質(zhì)微環(huán)境形成的新機制。從臨床角度看，這項研究為PDAC提出了一種協(xié)同免疫治療策略。UBE2T的高選擇性低毒性抑制劑PGG，能夠破壞腫瘤細胞與CAFs之間的乳酸代謝串擾，減輕基質(zhì)增生，增強瘤內(nèi)CD8⁺T細胞浸潤，并與抗PD-1療法產(chǎn)生協(xié)同作用。在臨床前模型中，PGG-抗PD-1聯(lián)合方案帶來了顯著的生存獲益，突出了該策略改善PDAC免疫治療效果的潛在臨床應(yīng)用價值。

（此部分詳細描述了研究中使用的臨床標本、類器官培養(yǎng)、轉(zhuǎn)基因小鼠構(gòu)建、各類動物模型建立及統(tǒng)計分析方法，確保了實驗的可重復(fù)性和科學(xué)性。）