《Aquaculture Reports》:Effects of alginate oligosaccharides on growth, immunity, and nutritional quality of Pacific white shrimp,
Litopenaeus vannamei
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為解決高密度養(yǎng)殖下南美白對蝦(Litopenaeus vannamei)生長受限、免疫力下降及營養(yǎng)風(fēng)味受損等問題,研究人員探討了添加低聚度(DP 2-5)褐藻寡糖(AOS)的作用。研究發(fā)現(xiàn),添加1.0%的AOS可顯著促進(jìn)對蝦生長、提高消化酶活性、增強(qiáng)免疫抗氧化能力,并改善肌肉鮮味氨基酸、多不飽和脂肪酸(如EPA、DHA)的含量,而不改變其基本營養(yǎng)成分。該研究為開發(fā)含AOS的功能性飼料提供了理論依據(jù)。
南美白對蝦(Litopenaeus vannamei)是全球水產(chǎn)養(yǎng)殖的明星物種,也是目前我國養(yǎng)殖產(chǎn)量最高的蝦類,以其高繁殖率、抗病力強(qiáng)、肉質(zhì)鮮美、營養(yǎng)價(jià)值高而備受青睞。然而,隨著養(yǎng)殖規(guī)模的持續(xù)擴(kuò)大,集約化、高密度的養(yǎng)殖模式導(dǎo)致蝦病發(fā)生日益頻繁和嚴(yán)重,引發(fā)生長遲緩、免疫力下降、死亡率升高,并對其營養(yǎng)價(jià)值和風(fēng)味產(chǎn)生不利影響。與此同時(shí),消費(fèi)者對蝦類產(chǎn)品的安全性和營養(yǎng)價(jià)值也提出了更高要求。在保障食品安全、減少抗生素使用的大背景下,探索天然生物活性物質(zhì)來提高水產(chǎn)動物的抗病力,成為產(chǎn)業(yè)亟待解決的實(shí)際問題。在飼料中添加功能性添加劑,是改善對蝦生長性能、疾病抵抗力和營養(yǎng)積累的重要途徑之一。功能性寡糖(Functional oligosaccharides)不僅能改善生長性能和免疫抗氧化能力,還能被腸道有益菌利用,改善腸道健康。其中,褐藻寡糖(Alginate Oligosaccharides, AOS)作為一種新一代益生元,具有更高的溶解性和穩(wěn)定性,更易被水生生物吸收,同時(shí)表現(xiàn)出抗氧化、抗炎、免疫調(diào)節(jié)等多種生物活性,在食品、醫(yī)藥和飼料添加劑行業(yè)已有廣泛應(yīng)用。但AOS的生物活性高度依賴于其聚合度(Degree of Polymerization, DP)和古羅糖醛酸(Guluronate, G)/甘露糖醛酸(Mannuronate, M)比例。此前關(guān)于AOS在對蝦養(yǎng)殖中的應(yīng)用研究多使用較高聚合度(DP>10)的AOS,并主要關(guān)注其抗病性能。隨著褐藻膠裂解酶的工業(yè)化生產(chǎn),使得以更經(jīng)濟(jì)環(huán)保的方式獲得低聚度(DP<5)AOS成為可能。鑒于低聚度AOS在抗氧化和調(diào)節(jié)代謝方面的潛力,其在促進(jìn)對蝦健康生長、改善肌肉營養(yǎng)品質(zhì)方面的作用及分子機(jī)制值得深入探究。為此,來自山東省海洋科學(xué)研究院的研究團(tuán)隊(duì)在《Aquaculture Reports》上發(fā)表研究,系統(tǒng)評估了低聚度AOS在南美白對蝦養(yǎng)殖中的應(yīng)用潛力。
為開展本研究,研究人員主要運(yùn)用了以下幾項(xiàng)關(guān)鍵技術(shù)方法:首先,通過高效液相色譜(HPLC)確定了所用AOS的聚合度(DP 2-5)及單糖組成。其次,設(shè)計(jì)了為期60天的養(yǎng)殖試驗(yàn),將初始體重約0.54克的南美白對蝦分為4組,分別投喂添加了0%(對照)、0.5%、1.0%和1.5% AOS的飼料。實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí),采集了蝦的腸道、肝胰腺和肌肉樣本。隨后,利用商業(yè)試劑盒檢測了生長性能指標(biāo)、腸道消化酶(如淀粉酶、脂肪酶、胰蛋白酶)以及肝胰腺免疫抗氧化酶(如超氧化物歧化酶SOD、過氧化氫酶CAT、堿性磷酸酶AKP)的活性。通過國標(biāo)方法分析了肌肉的基本營養(yǎng)成分、氨基酸和脂肪酸組成。運(yùn)用轉(zhuǎn)錄組測序技術(shù)分析了肝胰腺的差異表達(dá)基因及其富集的通路。最后,采用16S rRNA測序技術(shù)分析了腸道微生物菌群的多樣性和組成結(jié)構(gòu)。
3.1. AOS組分
通過HPLC分析確認(rèn),本研究所用AOS的聚合度范圍為2-5,其中DP2占25.78%,DP3占40.15%。單糖組成分析顯示,D-甘露糖醛酸與L-古羅糖醛酸的比例為1.09。
3.2. 投喂含AOS飼料的對蝦生長性能
生長性能指標(biāo)顯示,所有AOS添加組的存活率(SR)均顯著高于對照組。其中,添加1.0% AOS組的終末體重(FBW)、增重率(WGR)和特定生長率(SGR)最高,且飼料轉(zhuǎn)化率(FCR)最低,表明1.0%的添加水平能最佳地促進(jìn)對蝦生長并提高飼料利用率。
3.3. 對蝦腸道消化酶活性
AOS的添加顯著影響了腸道消化酶活性。1.0% AOS組的脂肪酶和胰蛋白酶活性最高,0.5% AOS組的淀粉酶和纖維素酶活性最高。這表明AOS能增強(qiáng)對蝦的消化能力,且不同酶類對AOS濃度的響應(yīng)不同。
3.4. 全蝦基本成分
飼料中添加AOS對全蝦肌肉的水分、灰分、粗蛋白和粗脂肪含量均無顯著影響,說明AOS并未改變對蝦的基本營養(yǎng)成分。
3.5. 投喂AOS的對蝦肌肉氨基酸組成
在檢測到的18種氨基酸中,添加0.5%和1.0% AOS顯著提高了總氨基酸(TAAs)和鮮味氨基酸(UAAs,如谷氨酸Glu、天冬氨酸Asp、甘氨酸Gly)的含量,從而增強(qiáng)了對蝦的鮮味。但過高劑量(1.5%)則無此效果。
3.6. 投喂AOS的對蝦肌肉脂肪酸組成
AOS的添加顯著提高了肌肉中多不飽和脂肪酸(PUFA)的含量,特別是二十碳五烯酸(EPA,C20:5)和二十二碳六烯酸(DHA,C22:6)分別增加了44.83%-65.52%和87.50%-125.00%。1.0% AOS組的總脂肪酸(TFA)、單不飽和脂肪酸(MUFA)和PUFA含量均最高,顯著優(yōu)化了脂肪酸組成。
3.7. 投喂AOS的對蝦肝胰腺免疫和抗氧化酶活性
酶活性檢測表明,AOS能增強(qiáng)對蝦的免疫和抗氧化功能。所有AOS添加組的過氧化氫酶(CAT)活性均顯著高于對照組。1.0% AOS組的超氧化物歧化酶(SOD)和溶菌酶(LZM)活性最高。不同濃度的AOS對堿性磷酸酶(AKP)和酸性磷酸酶(ACP)的影響各異。
3.8. 對蝦肝胰腺轉(zhuǎn)錄組分析
轉(zhuǎn)錄組分析揭示了AOS作用的分子機(jī)制。與對照組相比,0.5%、1.0%和1.5% AOS添加組分別有3007、477和237個(gè)差異表達(dá)基因(DEGs)。基因本體(GO)和京都基因與基因組百科全書(KEGG)通路富集分析顯示,0.5% AOS組基因主要富集于碳水化合物和脂肪酸代謝過程;1.0% AOS組基因富集于脂肪酸代謝、氨基酸糖代謝等通路,促進(jìn)了脂肪酸和不飽和脂肪酸的合成;而1.5% AOS組中,與纈氨酸、亮氨酸和異亮氨酸合成相關(guān)的通路呈下調(diào)趨勢。
3.9. 投喂AOS飼料的對蝦腸道菌群
腸道微生物分析表明,AOS顯著改變了對蝦的腸道菌群結(jié)構(gòu)。所有AOS添加組均降低了彎曲桿菌門(Campylobacterota)和弓形桿菌科(Arcobacteraceae)的相對豐度,這些菌與腸炎相關(guān)。1.0% AOS組的物種多樣性(Shannon指數(shù))最高,菌群結(jié)構(gòu)最均衡。此外,AOS促進(jìn)了厚壁菌門(Firmicutes)和擬桿菌門(Bacteroidetes)等有益菌門的增殖。
本研究通過系統(tǒng)的養(yǎng)殖實(shí)驗(yàn)和多組學(xué)分析,得出以下核心結(jié)論:膳食中添加低聚度(DP 2-5)褐藻寡糖(AOS)能顯著促進(jìn)南美白對蝦的生長、提高存活率、增強(qiáng)消化酶活性和免疫抗氧化功能,并優(yōu)化肌肉的氨基酸和脂肪酸組成,尤其是提升了鮮味氨基酸和具有高營養(yǎng)價(jià)值的EPA、DHA等多不飽和脂肪酸的含量,而不影響其基本營養(yǎng)成分。其作用機(jī)制涉及多個(gè)層面:在生理層面,AOS通過調(diào)節(jié)腸道菌群(如增加有益菌、抑制潛在致病菌)和增強(qiáng)宿主消化酶分泌來改善腸道健康和營養(yǎng)吸收;在分子層面,AOS能激活對蝦肝胰腺中與氨基酸代謝、脂肪酸合成與延長相關(guān)的基因通路,同時(shí)上調(diào)免疫抗氧化相關(guān)通路(如細(xì)胞色素P450代謝、吞噬體通路),從根源上促進(jìn)了有益營養(yǎng)物質(zhì)的積累并增強(qiáng)了機(jī)體的防御能力。然而,AOS的作用效果存在劑量依賴性,并非添加越多越好。綜合各項(xiàng)指標(biāo),0.5%至1.0%的添加水平對促進(jìn)對蝦生長和健康最為優(yōu)越,而過高的劑量(1.5%)反而可能導(dǎo)致生長性能下降和代謝負(fù)擔(dān)。這項(xiàng)研究首次系統(tǒng)闡明了低聚度AOS在南美白對蝦養(yǎng)殖中的多維度益處及其內(nèi)在的分子和微生物學(xué)機(jī)制,不僅為AOS作為一種綠色、高效的功能性飼料添加劑的應(yīng)用提供了扎實(shí)的科學(xué)依據(jù)和明確的推薦劑量,也為開發(fā)旨在同時(shí)提升水產(chǎn)動物生長性能、抗病力和產(chǎn)品品質(zhì)的新型飼料策略開辟了新思路。