摘要

引言與目的

皮膚利什曼病（CL）是一種發生在熱帶和亞熱帶地區的地方性疾病，由利什曼原蟲（Leishmania）引起。該疾病的快速準確診斷對于預后、控制和預防至關重要。鑒于準確診斷的重要性以及避免常用方法可能出現的錯誤，我們旨在設計一種使用定量實時PCR（qPCR）的有效方法，以實現對該疾病的準確且可行的診斷。

材料與方法

共納入109個樣本：89個來自Semnan和Golestan省流行地區的臨床疑似CL患者的陰性涂片，10個寄生蟲載量不同的陽性樣本，以及10個患有其他類似CL癥狀的皮膚疾病的患者的樣本，以評估檢測的特異性。DNA采用酚-氯仿法提取。內部開發的qPCR使用針對利什曼原蟲動質體DNA的特異性引物進行。此外，還使用了傳統的ITS-PCR作為補充方法。PCR陽性樣本被送交Sanger測序，結果與患者的臨床數據進行了比對。

結果

在重新檢查陰性涂片后，通過顯微鏡方法發現有4例（4.49%）為陽性。在85個陰性樣本中，qPCR檢測出9例陽性（10.58%）。該技術證明了其在臨床條件下能夠檢測到極低水平的寄生蟲載量（1+級）。實驗室條件下的檢測限確定為0.001 ng/μl。傳統的ITS-PCR在qPCR陽性樣本中識別出6例陽性。測序分析確認所有分離株均屬于Leishmania major。

討論與結論

本研究結果表明，內部開發的qPCR是一種高度敏感和特異的CL診斷工具，即使在陰性涂片的情況下也能發揮作用。它可以作為顯微鏡檢查的寶貴補充和可靠方法，從而實現更早、更準確的診斷，并防止誤診或不當治療。此外，在所有陽性病例中鑒定出L. major，進一步支持了研究區域現有的流行病學數據。