《ASN Neuro》：Reboxetine Treatment Reduces Hippocampal Gliosis in the P301S Tauopathy Mouse Model
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本研究證實，針對阿爾茨海默病等神經退行性疾病中常見的去甲腎上腺素能神經元早期喪失，利用去甲腎上腺素再攝取抑制劑瑞波西汀（reboxetine）進行干預，可有效減輕P301S Tau蛋白病小鼠模型海馬區的神經炎癥反應，抑制小膠質細胞和星形膠質細胞的異常增殖與活化。這項工作為瑞波西汀作為AD（Alzheimer’s Disease）及其他Tau蛋白病相關疾病的潛在“老藥新用”（Drug Repurposing）策略提供了新的實驗依據，尤其展示了即使在疾病晚期階段開始治療仍能產生積極效應。
背景與目標
阿爾茨海默病（AD）的早期病理改變之一是腦干去甲腎上腺素能神經元，特別是藍斑核（LC）的喪失，這導致腦內去甲腎上腺素水平下降，加劇神經炎癥進程。鑒于去甲神經遞質對神經炎癥具有已知的抑制作用，通過藥物手段補償其不足成為一種有前景的治療策略。本研究旨在探究選擇性去甲腎上腺素再攝取抑制劑瑞波西汀，在AD的另一重要病理模型——表達人類P301S突變型微管相關蛋白tau（MAPT）的P301S小鼠模型中的作用，特別是對神經炎癥的核心執行者：小膠質細胞和星形膠質細胞的影響，以補充其在5xFAD（淀粉樣蛋白）模型上已證實的效果。
研究方法
研究使用了9月齡的雄性野生型（WT）和P301S轉基因小鼠。通過皮下植入微型滲透泵，以每天約10 mg/kg體重的劑量持續給藥瑞波西汀或對照溶媒28天。治療后，收集海馬組織樣本，綜合運用多種技術進行分析：
- 1.
mRNA分析：通過定量實時PCR（QPCR）檢測小膠質細胞標記物CX3CR1、星形膠質細胞標記物膠質纖維酸性蛋白（GFAP）和S100B鈣結合蛋白B（S100B）的轉錄水平。
- 2.
蛋白質分析：使用Western Blot技術檢測GFAP蛋白的表達水平。
- 3.
免疫組織化學：利用特異性抗體標記Iba1（小膠質細胞）和GFAP（星形膠質細胞），通過共聚焦顯微鏡成像，量化海馬齒狀回（DG）、CA1、CA3區及皮質中陽性細胞的密度、形態和激活狀態。對小膠質細胞的分析包括測量細胞體大小、覆蓋環境面積（CEA）和轉化指數（TI）；對星形膠質細胞則量化了分支總長度。
- 4.
流式細胞術：從海馬組織分離細胞，通過細胞表面標記物CD11b+/CD45Int和ACSA-2+分別精確計數小膠質細胞和星形膠質細胞的百分比。
研究結果
1. 瑞波西汀降低P301S小鼠海馬小膠質細胞密度
在P301S小鼠海馬中，小膠質細胞特異性受體CX3CR1的mRNA水平顯著升高。瑞波西汀治療顯著抑制了這種升高。免疫組化和流式細胞術結果一致證實，P301S小鼠海馬DG和CA1區的小膠質細胞數量顯著增加，而瑞波西汀治療有效降低了這種異常積累，尤其在DG和CA1區效果顯著。皮層區域未觀察到顯著差異，這與已知的Tau病理在海馬區更突出的現象相符。
2. 瑞波西汀改善P301S小鼠小膠質細胞促炎形態
形態學分析進一步揭示了瑞波西汀的抗炎作用。P301S小鼠海馬小膠質細胞表現出典型的激活形態：細胞體增大。瑞波西汀治療有減少這種增大的趨勢。更重要的是，瑞波西汀顯著阻止了P301S小鼠小膠質細胞覆蓋環境面積（CEA）的減少，并在CA1區及所有海馬區域總和上效果顯著。同時，瑞波西汀治療也逆轉了P301S小鼠小膠質細胞轉化指數（TI）的降低，表明藥物能促進小膠質細胞向更靜息、分支更復雜的形態轉變，降低其反應性。
3. 瑞波西汀減輕P301S小鼠海馬星形膠質細胞密度與活化
與對小膠質細胞的作用類似，瑞波西汀也顯著抑制了P301S小鼠海馬的星形膠質細胞增生和活化。PCR和Western Blot結果顯示，P301S小鼠海馬中星形膠質細胞標記物GFAP和S100B的mRNA及GFAP蛋白水平均顯著升高，而瑞波西汀治療逆轉了這種升高。流式細胞術精確地證實，瑞波西汀降低了P301S小鼠海馬中星形膠質細胞占總細胞的比例。
免疫組化分析從空間層面提供了更詳細的信息：在DG、CA1、CA3三個海馬亞區，瑞波西汀均顯著減少了GFAP陽性星形膠質細胞的數量和免疫反應陽性區域的面積。此外，對星形膠質細胞分支長度的測量發現，P301S小鼠的分支總長度增加（提示反應性增強），而瑞波西汀治療在DG和CA1區顯著降低了這一指標。在皮層區域，雖因基礎數量少且個體差異大未達統計學顯著，但也觀察到了瑞波西汀減少GFAP陽性細胞數量和分支長度的趨勢。
討論與意義
該研究證實，對9月齡（相當于AD晚期階段）的P301S小鼠進行為期28天的瑞波西汀持續給藥，能夠顯著降低海馬區小膠質細胞和星形膠質細胞的異常積累與激活。這為瑞波西汀作為AD及相關Tau蛋白病的潛在治療藥物提供了新的證據。
去甲腎上腺素是中樞神經系統關鍵的抗炎介質之一。瑞波西汀通過抑制其再攝取，增加突觸間隙濃度，從而可能增強其抗炎信號。結合先前在5xFAD（淀粉樣蛋白）模型中的研究，結果表明瑞波西汀對AD兩大核心病理（淀粉樣蛋白Aβ和Tau蛋白）引發的神經炎癥均有抑制作用，這使其比靶向單一病理的療法更具優勢。
研究也指出了重要注意事項：去甲腎上腺素對神經炎癥的調節具有“情境依賴性”。有報道顯示，在特定條件下（如過高劑量、長期給藥、或在不同疾病模型中），提升去甲腎上腺素水平可能通過其代謝產物如DOPEGAL（3,4-二羥基苯基乙二醇醛）反而促進Tau的聚集和毒性。因此，藥物的劑量、治療時機（是否存在明顯的神經炎癥背景）需要精準把控。此外，本研究僅使用了雄性小鼠，未來需要在雌性動物中驗證其效果，并直接測量腦內去甲腎上腺素水平以明確藥效關聯。
結論
綜上所述，本研究證明瑞波西汀能夠有效減輕Tau蛋白病模型小鼠的神經膠質增生和炎癥反應，支持將其作為一種有潛力的“老藥新用”策略，用于AD及其他神經退行性疾病的治療探索。未來的AD療法很可能采用多靶點聯合策略，而在新藥研發漫長且充滿不確定性的背景下，對已獲批藥物的“再利用”研究，為更快地為患者提供新的治療選擇帶來了希望。
