早期生活壓力對哺乳動物（包括人類）的神經發育和行為有長期影響[1]。當個體經歷過度壓力時，例如與照顧者長時間分離，在關鍵發育期間下丘腦-垂體-腎上腺軸可能會發生持續改變，可能引發影響認知、情緒和社會功能的表觀遺傳變化[2]、[3]、[4]、[5]。這些發現表明早期生活壓力如何導致后續的精神疾病。

在嚙齒動物中，超聲波發聲（USVs）是評估情緒狀態的可靠指標。例如，高頻USVs（約50 kHz）與積極情緒狀態相關，而低頻USVs（約20 kHz）與消極情緒狀態相關[6]、[7]。此外，當小鼠或大鼠幼崽與母親分離時，它們會發出USVs作為求救信號，以吸引母親的注意并引發照顧行為[8]、[9]。在這種情況下，幼崽的USVs通常被視為內部狀態的代理指標，反映了喚醒、類似焦慮的反應以及尋求母親照顧的動機驅動等情感和生理因素的結合。重要的是，USV測量并不假設以一對一的方式映射到單一的內部狀態；相反，呼叫率和聲學結構的變化被解釋為這些潛在狀態的變化。此外，幼崽的USVs通過其聲學結構明顯傳達了動物內部狀態和情緒狀況的具體信息，可能影響母親的行為和隨后的社會互動[10]、[11]。根據頻率調制和持續時間等聲學變量，幼崽的USVs可以分為幾種音節模式[7]、[12]、[13]、[14]、[15]、[16]。然而，這些音節模式是隨機生成的還是傳達了特定的交流信息仍有爭議，尚未完全闡明[17]。

母體分離（MS）是一種常用的實驗范式，用于模擬嚙齒動物的早期生活壓力[18]。MS會破壞母親與其后代之間的互動，并據報道會導致神經內分泌系統的長期變化[19]、[20]、[21]。根據最近的一項系統綜述[22]，MS方案大致可以分為兩種類型：重復MS，通常涉及多天內每天60-480分鐘的分離；以及單次MS，即幼崽連續24小時與母親分離。重復MS與記憶缺陷和類似抑郁的行為風險增加有關，盡管其影響可能因品系和性別而異[23]、[24]、[25]。相比之下，單次MS會引起更嚴重的應激反應，往往導致更明顯的行為和生理后果[26]。我們之前使用單次24小時MS方案在小鼠出生后第4天（P4）到第5天（P5）的研究表明左海馬神經元數量減少[27]。與生理和行為癥狀相比，關于USVs影響的研究相對較少。值得注意的是，MS對USV產生的影響在不同研究中有所不同。例如，在C57BL/6J幼鼠中，一些研究報道MS壓力不會影響USV的產生[28]，而在某些大鼠品系中，重復MS壓力會減少幼崽發出的USVs數量[29]、[30]。在我們的蒙古沙鼠研究中，我們發現從P7到P8的單次24小時母體分離導致成年后社交發聲數量的長期變化[31]。多項研究已經考察了重復MS對USVs的影響；然而，據我們所知，尚未有研究調查單次MS方案對小鼠的影響。

本研究旨在通過評估單次MS壓力對發聲模式的影響，來研究早期生活壓力條件下小鼠幼崽USVs的聲學特征。為此，我們選擇了雜交ICR小鼠，這種小鼠可以在不同的遺傳背景下檢測到MS的影響。該品系在社交測試中的表現與C57BL/6J相當[32]。我們研究了單次24小時MS事件是否改變了幼崽USVs的聲學結構，并通過標準化的聲學分析，試圖揭示MS對USVs聲學結構的系統影響。

在P4、P5（分離后）、P6、P8、P11和P14測量了幼崽的體重（圖1）。這些數據使用雙因素混合設計ANOVA進行分析，年齡作為組內因素，組別（對照組 vs. MS）作為組間因素。分析顯示年齡（F (1.259, 47.83) = 2085, p < 0.001）、組別（F (1, 38) = 41.34, p < 0.001）以及年齡 × 組別的交互作用（F (1.259, 47.83) = 14.46, p < 0.001）具有顯著意義。事后采用Bonferroni校正。

在包括ICR在內的多種小鼠品系中，幼崽的USVs數量從出生后第0天（P0）開始增加，在P6左右達到峰值，然后在大約P14時消失[8]、[36]、[37]、[38]。在本研究中，對照組表現出類似的發展過程（圖2A）。USVs已被廣泛記錄為幼崽神經發育和應激反應的可靠指標[9]。因此，如MS這樣的壓力源會影響發聲數量和各種聲學特征。

本工作得到了JSPS KAKENHI資助，項目編號為22K18661、23KJ2084和23K12938。

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伊藤幸：撰寫 – 審稿與編輯、驗證、資源獲取、項目管理、方法論、研究、資金獲取、概念構思。西堀亮：撰寫 – 審稿與編輯、初稿撰寫、可視化、驗證、軟件使用、項目管理、方法論、研究、資金獲取、數據分析、概念構思。豬崎沙織：研究。小林康太：撰寫 – 審稿與編輯、監督、項目管理

我們感謝Hiryu教授和Tachibana Ryosuke O博士在本實驗中提供的寶貴建議。