《MEDIATORS OF INFLAMMATION》：SNHG5 Exacerbates Sepsis-Induced Inflammatory Injury in Coronary Artery Endothelial Cells by Regulating METAP2-Mediated IL-8 Secretion
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本文聚焦膿毒癥（Sepsis）心血管損傷，揭示長鏈非編碼RNA（lncRNA）SNHG5通過海綿吸附miR-377-3p上調蛋氨酸氨肽酶2（METAP2）表達，進而促進白介素-8（IL-8）分泌及內皮細胞凋亡的新調控軸。該研究為深入理解膿毒癥內皮功能障礙的分子機制提供了新視角。
引言
膿毒癥是一種由感染引發的危及生命的全身性反應，其中心血管系統是易損靶點，內皮功能障礙在其中扮演核心驅動角色。長鏈非編碼RNA（lncRNA）作為基因表達的重要調控因子，在膿毒癥發病機制中的作用日益受到關注。本研究旨在探究lncRNA SNHG5在膿毒癥誘導的冠狀動脈損傷中的潛在作用，并解析其調控機制。
材料與方法
本研究采用盲腸結扎穿刺術（CLP）構建小鼠膿毒癥模型。收集血清和冠狀動脈組織，使用酶聯免疫吸附試驗（ELISA）和實時定量聚合酶鏈反應（qPCR）評估炎癥標志物及lncRNA表達。在體外實驗中，使用膿毒癥小鼠血清刺激小鼠主動脈內皮細胞（mAECs）。通過雙熒光素酶報告基因實驗探究SNHG5/微小RNA（miRNA）-377-3p/蛋氨酸氨肽酶2（METAP2）軸的相互作用。采用功能缺失、功能獲得及挽救實驗闡明這些基因在膿毒癥中的功能。實驗還涉及蛋白質印跡（Western blotting）、流式細胞術檢測細胞凋亡、細胞計數試劑盒-8（CCK-8）檢測細胞活力以及免疫共沉淀（Co-IP）等技術。
結果
- 1.
膿毒癥小鼠冠狀動脈中SNHG5異常高表達：與假手術組相比，膿毒癥小鼠血清中腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、白細胞介素（IL）-1α、IL-1β、IL-6、IL-8和IL-10水平顯著升高。冠狀動脈組織中，內皮型一氧化氮合酶（eNOS）蛋白表達下調，內皮素-1（ET-1）蛋白表達上調，表明內皮功能紊亂。在檢測的多個炎癥相關lncRNA中，SNHG5在膿毒癥小鼠冠狀動脈組織和血清中上調最為顯著。
- 2.
SNHG5作為miR-377-3p的競爭性內源RNA調控METAP2表達：生物信息學分析與實驗驗證表明，SNHG5可作為miR-377-3p的分子海綿（ceRNA），從而上調METAP2的表達。在膿毒癥冠狀動脈中，miR-377-3p表達下調，METAP2表達上調，且與SNHG5表達呈負/正相關。雙熒光素酶報告基因實驗證實了miR-377-3p與SNHG5及METAP2 3′-非翻譯區（UTR）的特異性結合。
- 3.
SNHG5在mAECs中促進METAP2表達：膿毒癥血清刺激可顯著上調mAECs中SNHG5和METAP2的表達，下調miR-377-3p表達。敲低SNHG5能上調miR-377-3p并抑制METAP2的表達，而使用miR-377-3p抑制劑可逆轉此效應，蛋白水平變化與RNA一致。
- 4.
敲低SNHG5改善膿毒癥誘導的內皮細胞凋亡：膿毒癥血清處理降低了mAECs的細胞活力并誘導其凋亡，而敲低SNHG5能提高細胞活力、減少細胞凋亡，并逆轉膿毒癥血清引起的eNOS下調和ET-1上調。同時，敲低SNHG5降低了促凋亡蛋白半胱天冬酶-3（caspase-3）和Bax的水平，提高了抗凋亡蛋白B細胞淋巴瘤-2（Bcl-2）的水平。此外，SNHG5敲低顯著降低了IL-8的分泌，該效應可被miR-377-3p抑制劑逆轉。
- 5.
miR-377-3p抑制METAP2促進的膿毒癥內皮細胞凋亡：敲低METAP2或過表達miR-377-3p均可抑制膿毒癥血清誘導的內皮細胞凋亡，降低caspase-3和Bax蛋白水平，上調eNOS和Bcl-2蛋白水平。值得注意的是，雖然IL-8 mRNA水平未變，但METAP2敲低減少了IL-8的分泌，并增加了細胞內IL-8水平，Co-IP實驗證實了METAP2與IL-8在膿毒癥條件下的直接相互作用。相反，過表達METAP2會增加IL-8分泌和內皮細胞凋亡，而這些效應可被miR-377-3p模擬物所減弱。
討論
內皮功能障礙是膿毒癥心血管損傷的標志。本研究發現SNHG5在膿毒癥冠狀動脈中顯著上調，并首次證實其通過ceRNA機制吸附miR-377-3p，在膿毒癥條件下促進冠狀動脈內皮細胞凋亡。miR-377-3p在膿毒癥中發揮保護性的抗凋亡功能。METAP2作為miR-377-3p的下游靶點，在膿毒癥內皮中扮演促凋亡角色，可能通過影響IL-8等蛋白的加工和分泌來發揮作用。IL-8是膿毒癥的關鍵炎癥因子，本研究揭示的SNHG5/miR-377-3p/METAP2軸是調控膿毒癥中IL-8分泌的新機制。這些發現不僅深化了對膿毒癥過度炎癥分子基礎的理解，也為減輕內皮功能障礙提供了潛在的治療靶點。
結論
綜上所述，在膿毒癥小鼠冠狀動脈中，SNHG5表達升高。SNHG5可能通過調控miR-377-3p/METAP2/IL-8軸，加劇動脈內皮細胞的炎癥損傷。該研究為膿毒癥心血管并發癥的機制研究和潛在治療策略開發提供了新的線索。
