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        關于CaCl2濃度調控大豆蛋白纖維化過程的機制性研究:纖維化動力學、纖維形態及肽組成

        《Food Hydrocolloids》:Mechanistic insights into soy protein fibrillation regulated by CaCl 2 concentration: Fibrillation kinetics, fibril morphology, and peptide composition

        【字體: 時間:2026年03月01日 來源:Food Hydrocolloids 12.4

        編輯推薦:

          鈣離子強度通過調控大豆蛋白納米纖維(SPNF)的形態、結構和肽組成影響其形成動力學。實驗表明,100 mM CaCl2促進SPNF快速生長,形成柔韌纖維且β-折疊含量最高;200-300 mM時纖維變硬且核心肽比例上升,提示離子強度通過鹽析-like機制調控纖維組裝。研究揭示了離子強度與纖維特性間的關聯,為功能蛋白材料開發提供新機制。

          
        趙赫凱|黃玉陽|齊寶坤|李陽
        中國黑龍江省哈爾濱市東北農業大學食品科學學院,郵編150030

        摘要

        氯化鈣可以顯著增強大豆蛋白納米纖維(SPNF)的結構特性;然而,CaCl2誘導的離子強度對纖維化過程的調控作用及其潛在機制仍需進一步闡明。在本研究中,系統地探討了不同CaCl2濃度(0–300 mM)下SPNF的纖維化動力學、形態、構象特征和肽組成。凝膠電泳、粒徑分析及Thioflavin T熒光實驗表明,隨著CaCl2濃度的增加,蛋白質水解速率加快,而纖維生長速率在100 mM時達到最大值,隨后由于大聚體的形成而下降。原子力顯微鏡觀察發現,在較低的CaCl2濃度(≤ 100 mM)下,柔性纖維隨著鹽濃度的增加和孵育時間的延長而延長,24小時后形成纏結的成熟纖維。相反,在200和300 mM的CaCl2條件下形成了剛性纖維,這些纖維的輪廓長度減小但持久長度增加。傅里葉變換紅外光譜顯示,盡管在100 mM CaCl2時纖維系統的β-折疊含量最高,但在200 mM時分離出的纖維組分顯示出更高的β-折疊含量。陷阱離子遷移譜和飛行時間質譜進一步證實,200 mM條件下形成的剛性纖維含有較短的肽序列,并且纖維形成肽中核心肽的比例較高,表明核心序列在纖維化過程中發揮了更大的作用。本研究建立了鹽濃度、纖維形態和纖維肽組成之間的潛在聯系,推進了對離子強度調控大豆蛋白纖維化過程的理論理解。

        引言

        蛋白質分子在外部因素的影響下會發生多維聚集,這賦予它們在食品加工中的優良功能特性(Nicolai & Durand, 2013)。三維聚集形成填充空間的網絡,改變體系的流變性質;而二維界面聚集則增強乳液和泡沫的穩定性(Nicolai et al., 2013)。最近的研究發現,由食品來源蛋白質通過一維定向組裝形成的蛋白質纖維聚集體顯著增強了這些多維聚集所產生的功能特性(Meng, Wei, & Xue, 2022)。由于蛋白質纖維具有較高的長寬比和柔韌性,它們不僅顯著提高了低體積分數溶液系統的粘度和凝膠化程度,還在界面處表現出極高的脫離能量,進一步抑制了兩相界面的不穩定(Yue et al., 2022)。值得注意的是,雖然食品來源的纖維具有與病理淀粉樣纖維相似的交叉β結構,但它們不會引發淀粉樣病的致病性,并保留了天然蛋白質的營養價值(Rahman et al., 2023; Xu et al., 2023)。因此,蛋白質纖維化已成為開發新型食品成分和生物相容性材料的有前景的方法。
        植物蛋白因其低成本和可持續性而受到重視,已成為設計食品來源纖維的重要來源。然而,其緊湊的球形結構阻礙了纖維化過程,因為這些結構掩蓋了纖維形成所需的自互補序列(Cao & Mezzenga, 2019)。因此,酸熱處理(pH < 2.5, T > 80 °C)被廣泛認為是實現植物蛋白有效纖維化的先決條件,這種處理可以展開蛋白質并釋放纖維形成肽(Lambrecht et al., 2019; Zheng, Gao, Chang, Sun, & Fang, 2023)。大豆蛋白作為最優質的植物蛋白之一,含有豐富的酸性氨基酸(谷氨酸和天冬氨酸),這些氨基酸在酸熱處理下促進快速水解和組裝,使其具有強烈的纖維化傾向(Ji et al., 2023)。與天然大豆蛋白相比,大豆蛋白納米纖維(SPNF)表現出更優的凝膠化和乳化性能,在鐵強化、生物支架和可持續包裝等應用中具有巨大潛力(Wei et al., 2023; Xiang, Wu, Wei, Shao, & Sun, 2021; Yuan et al., 2025)。然而,纖維的功能特性與其結構和形態密切相關(Hoppenreijs et al., 2022),因此有效調控大豆蛋白的纖維化過程對于提升其功能性能和擴大應用范圍至關重要。
        蛋白質的纖維化行為主要受其內在結構特征和孵育參數的控制。因此,物理處理(如超聲波、微波和脈沖電場)以及環境參數(如pH值、溫度和離子強度)的調整已被廣泛用于調控纖維化過程(Cao & Mezzenga, 2019)。其中,離子強度通過靜電屏蔽、鹽橋接和特定離子效應調節纖維形成肽之間的相互作用,從而在調控纖維特性方面發揮關鍵作用(Loveday, Su, Rao, Anema, & Singh, 2012)。Li等人(2021)報告稱,50 mM NaCl促進了米谷蛋白纖維的延長,而150 mM NaCl雖然提高了生長速率,但產生了較短的纖維。Wang等人(2025)發現亞麻籽蛋白纖維在NaCl濃度增加時從剛性結構轉變為柔性結構,且柔性纖維由較短的肽組成。值得注意的是,離子的加入有可能協同構建功能性材料,如纖維鐵強化劑和功能性涂層(Saif, Zhang, Zhang, Gu, & Yang, 2019; Zhou et al., 2025)。先前的研究表明,在相同摩爾濃度下,二價CaCl2比單價NaCl更有效地增強了纖維的結構有序性和輪廓長度,并顯著提高了其熱穩定性(Zhao, Xu, Yuan, Qi, & Li, 2024; Zhao, Lu, Huang, Qi, & Li, 2026)。因此,使用CaCl2來調控大豆蛋白的纖維化特性有助于擴大其應用范圍,并進一步放大特定離子效應對纖維化過程的影響(Loveday et al, 2010)。盡管已有文獻記錄了CaCl2濃度對SPNF生長、聚集和抗氧化特性的影響(Miao et al., 2023),但CaCl2調控大豆蛋白纖維化的具體調控模式和機制仍不明確。
        因此,本研究采用不同濃度的CaCl2(0–300 mM)系統分析其對纖維化動力學、纖維形態、結構和肽組成特性的調控作用。更重要的是,本研究采用了一種新的視角,強調通過類似鹽析的聚集作用來區分高濃度CaCl2引起的形態轉變。纖維化動力學和形態演變通過凝膠電泳、Thioflavin T(Th T)熒光和原子力顯微鏡(AFM)進行監測。纖維內的構象轉變通過傅里葉變換紅外光譜(FTIR)和廣角X射線衍射(WAXS)進行表征。纖維形成肽和纖維核心肽通過超濾離心法分離,并利用陷阱離子遷移譜和飛行時間質譜(TIMS-TOF-MS)進行鑒定。這項工作為調控大豆蛋白纖維形成的離子強度依賴機制提供了新的見解。

        材料

        使用成熟大豆(Dongsheng-10品種;粗蛋白含量:40.02%)通過堿溶解-酸沉淀法提取大豆蛋白分離物(SPI)。Thioflavin T(Th T)、二硫蘇糖醇(DTT)和吲哚-3-乙酸(IAA)購自Macklin Biochemical Co., Ltd.(中國上海)。Pierce C18 Tip(20 μL)購自Thermo Fisher Scientific(美國馬薩諸塞州沃爾瑟姆)。胃蛋白酶(產品編號10108057001)、胰蛋白酶(產品編號T6567)和超濾管(15 mL,100

        初始蛋白質的表征

        環境變化(如構象展開和疏水殘基的暴露)引起的初始蛋白質結構變化會顯著影響其纖維化行為(Liu, Yang, Wang, Jiang, & Chen, 2024)。因此,我們首先明確了在不同CaCl2濃度下大豆蛋白的變化。如圖1A和B所示,分別測定了CaCl2

        結論

        本研究表明,由于離子強度增加而導致的類似鹽析的聚集在纖維化特性中起著重要的調控作用。較低濃度的CaCl2(≤ 100 mM)促進了柔性纖維的形成,伴隨著延遲階段的縮短、生長速率的加快、輪廓長度的增加以及氫鍵和β-折疊含量的提高。在100 mM CaCl2條件下,纖維的生長速率最快,轉化率最高,產生

        CRediT作者貢獻聲明

        趙赫凱:撰寫初稿、軟件使用、方法設計、數據管理、概念構建。黃玉陽:實驗研究、數據管理。齊寶坤:撰寫與編輯、方法設計、實驗研究、概念構建。李陽:項目監督、資源調配、項目管理

        未引用參考文獻

        Afkhami et al., 2024; Jalali et al., 2023; Li et al., 2024; Li et al., 2021; Morris et al., 2008; Mohammadian and Madadlou, 2018; Zhao et al., 2026.

        利益沖突聲明

        作者聲明他們沒有已知的財務利益或個人關系可能影響本文的研究結果。

        致謝

        我們衷心感謝重慶市自然科學基金(CSTB2023NSCQ-MSX0601)提供的財政支持。
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