《Methods》：Clinical assessment of the diagnostic performance of the LIAISON? Legionella urinary antigen assay
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Legionella尿液抗原檢測LIAISON?試驗(yàn)性能評估顯示其特異性100%、敏感性97%，與現(xiàn)有CE認(rèn)證方法等效，證實(shí)該化學(xué)發(fā)光免疫分析法通過雙抗原檢測（LPS和PAL）提升檢測靈敏度與特異性，適用于疑似肺炎患者快速診斷。
Jessica Cusato|Giorgia Menegatti|Monica Ravotto|Andrea Pighini|Francesco Capuano|Du?an Pícha|Gianluca Bianco|Camilla Martino|Marco Simiele|Antonio D’Avolio
意大利都靈大學(xué)醫(yī)學(xué)科學(xué)系
摘要
嗜肺軍團(tuán)菌是導(dǎo)致軍團(tuán)病的主要病原體，軍團(tuán)病是一種嚴(yán)重的肺炎。雖然培養(yǎng)仍是診斷的金標(biāo)準(zhǔn)，但其較長的檢測時間限制了其臨床實(shí)用性。快速檢測方法（如尿抗原檢測）可以改善檢測的及時性。LIAISON?軍團(tuán)菌尿抗原檢測是一種新型化學(xué)發(fā)光免疫測定法，用于檢測尿液中的可溶性軍團(tuán)菌抗原。本研究評估了該方法的性能，并將其與現(xiàn)有的CE認(rèn)證抗原檢測方法進(jìn)行了比較。
樣本來自六個外部實(shí)驗(yàn)室，使用LIAISON檢測方法和相應(yīng)的對比方法進(jìn)行了單獨(dú)分析。
LIAISON檢測方法的表現(xiàn)與參考方法相當(dāng)，顯示出100%的診斷特異性和97%的敏感性——在統(tǒng)計(jì)上與宣稱的98%相當(dāng)。值得注意的是，有四個樣本在不同檢測方法之間出現(xiàn)了結(jié)果差異，這突顯了軍團(tuán)菌感染的診斷復(fù)雜性。還進(jìn)行了接收者操作特征（ROC）分析，以確定最佳閾值并確認(rèn)檢測的臨界值。LIAISON檢測的結(jié)果與基于共識標(biāo)準(zhǔn)的預(yù)期結(jié)果進(jìn)行了比較。
總體而言，研究結(jié)果表明，LIAISON?軍團(tuán)菌尿抗原檢測方法在現(xiàn)實(shí)環(huán)境中對疑似肺炎患者的尿液樣本中嗜肺軍團(tuán)菌和長灘軍團(tuán)菌抗原的定性檢測具有可靠的臨床性能。
引言
軍團(tuán)菌是一種革蘭氏陰性細(xì)菌，存在于淡水環(huán)境（如湖泊或河流）中，也存在于人造水系統(tǒng)中，對人類健康構(gòu)成重大威脅[1]。通常，軍團(tuán)菌通過受污染的水源（包括熱水浴缸或空調(diào)系統(tǒng)）以氣溶膠形式被吸入[2]。
嗜肺軍團(tuán)菌是該屬中最常見的菌種，可引起軍團(tuán)病，這是一種嚴(yán)重的肺炎[3]。軍團(tuán)病的癥狀與其他類型的肺炎相似，可能導(dǎo)致診斷不足。一旦吸入，細(xì)菌會在肺部積聚，引起高燒、寒戰(zhàn)、咳嗽、呼吸急促、肌肉疼痛和頭痛等癥狀。在嚴(yán)重情況下，患者可能會出現(xiàn)胃腸道癥狀和意識混亂，尤其是在老年人或免疫功能低下的人群中[1]、[4]、[5]。在某些情況下，軍團(tuán)病可能是致命的，尤其是對于免疫抑制患者[1]。
軍團(tuán)菌暴發(fā)已在醫(yī)院、酒店和游輪等各種場所發(fā)生。公共衛(wèi)生官員在調(diào)查和控制暴發(fā)方面發(fā)揮著關(guān)鍵作用，以減少細(xì)菌的傳播并防止進(jìn)一步疾病的發(fā)生。通過適當(dāng)?shù)南境绦蚧驅(qū)嵤┧Y源管理計(jì)劃并對其進(jìn)行監(jiān)測，對于公共衛(wèi)生至關(guān)重要[6]。此外，準(zhǔn)確診斷軍團(tuán)菌感染對于有效的公共衛(wèi)生響應(yīng)也至關(guān)重要。
目前有多種診斷方法可供選擇[7]：培養(yǎng)是金標(biāo)準(zhǔn)，需要從呼吸道標(biāo)本（痰液、支氣管肺泡灌洗液或肺組織）中進(jìn)行培養(yǎng)[8]。然而，這種方法耗時較長，并需要特殊的培養(yǎng)基（如特定瓊脂）來促進(jìn)細(xì)菌生長。聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）具有高敏感性，可以直接從呼吸道標(biāo)本中檢測到軍團(tuán)菌DNA。該方法還可以區(qū)分不同種屬和血清型的軍團(tuán)菌，這對于流行病學(xué)研究非常重要。在這種情況下，下一代測序技術(shù)也可以使用[9]。檢測尿液中的軍團(tuán)菌抗原是另一種常用的方法，某些檢測方法可以在幾小時內(nèi)提供結(jié)果。這種方法特別有用，因?yàn)樗恍枰囵B(yǎng)。基本上，它可以檢測嗜肺軍團(tuán)菌血清型1——這是軍團(tuán)病最常見的原因——盡管它無法檢測其他血清型。血清學(xué)檢測通常不太適用于急性診斷。這些檢測可以檢測針對軍團(tuán)菌的抗體，但抗體的產(chǎn)生可能需要幾周時間，因此不太適合早期診斷。最后，環(huán)境采樣也有助于診斷暴發(fā)和感染源。在這種情況下，檢測水源有助于識別潛在的感染源，從而防止更多病例的發(fā)生[10]。
然而，盡管培養(yǎng)仍是金標(biāo)準(zhǔn)，但其較長的檢測時間和不理想的敏感性無法滿足臨床對準(zhǔn)確診斷的需求，特別是對于重癥患者。因此，迫切需要可靠的早期識別和診斷嗜肺軍團(tuán)菌的方法，例如尿抗原檢測，以提高我們快速識別軍團(tuán)菌感染的能力。
LIAISON檢測方法是一種完全自動化的化學(xué)發(fā)光免疫測定法，用于檢測尿液中軍團(tuán)菌的可溶性抗原，以支持對疑似肺炎患者尿液樣本中嗜肺軍團(tuán)菌和長灘軍團(tuán)菌抗原的定性檢測。該檢測基于創(chuàng)新的“雙抗原”檢測原理，可以同時檢測兩種軍團(tuán)菌抗原：脂多糖（LPS）和肽聚糖相關(guān)脂蛋白（PAL），從而提高敏感性和特異性。與LPS類似，PAL抗原也會在受感染的尿液中排出并可被檢測到，但與LPS不同的是，它在不同軍團(tuán)菌種屬和血清型中高度保守，因此可以檢測到非Lp1型的嗜肺軍團(tuán)菌和其他軍團(tuán)菌種。該檢測方法用于輔助診斷軍團(tuán)菌感染。檢測必須在LIAISON?分析儀（LIAISON? XL和LIAISON? XS）上進(jìn)行。
在這項(xiàng)研究中，我們通過描述該產(chǎn)品的臨床性能，并結(jié)合臨床數(shù)據(jù)，提供了LIAISON?軍團(tuán)菌尿抗原檢測方法有效性的證據(jù)，以幫助醫(yī)生做出最準(zhǔn)確的診斷。
研究設(shè)計(jì)
樣本收集工作由六個外部實(shí)驗(yàn)室完成（見附錄1），這些實(shí)驗(yàn)室負(fù)責(zé)收集并提供所有包含必要臨床數(shù)據(jù)的樣本。
關(guān)于樣本前處理步驟的詳細(xì)信息，請參閱相關(guān)使用說明書。
樣本使用LIAISON?檢測方法和相關(guān)使用說明書推薦的對比方法進(jìn)行了檢測。
檢測在兩個不同的檢測地點(diǎn)進(jìn)行
樣本收集
通過檢測307個符合條件的樣本（143個疑似肺炎患者的樣本，其中進(jìn)行了軍團(tuán)菌檢測；15個細(xì)菌性呼吸道感染患者的樣本（尿抗原檢測呈陽性）；68個尿路感染患者的樣本；以及81個看似健康的受試者的樣本），評估了LIAISON?軍團(tuán)菌尿抗原檢測方法的診斷性能。收集樣本的人口統(tǒng)計(jì)特征見表1。
LIAISON檢測方法與CE認(rèn)證檢測方法的比較
頻率分布情況
討論
通過對307個樣本的收集和分析，全面評估了LIAISON?軍團(tuán)菌尿抗原（Ag）檢測方法的診斷性能。這些樣本包括疑似肺炎患者、細(xì)菌性呼吸道感染患者和健康個體，反映了多樣化的患者群體，體現(xiàn)了該方法在各種臨床場景中的潛在應(yīng)用價值。
利益沖突聲明
作者聲明以下可能被視為潛在利益沖突的財(cái)務(wù)利益/個人關(guān)系：MONICA RAVOTTO、ANDREA PIGHINI、FRANCESCO CAPUANO表示獲得了DiaSorin Inc.的財(cái)務(wù)支持；JESSICA CUSATO表示與COQUA LAB存在咨詢或顧問關(guān)系。如果還有其他作者，他們聲明自己沒有已知的可能影響研究結(jié)果的財(cái)務(wù)利益或個人關(guān)系。
