《Virology》：Therapeutic potential of an anti-Gn glycoprotein antibody against severe fever with thrombocytopenia syndrome virus infection in A129 mice
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SFTS病毒感染治療研究顯示Ab10抗體在體外可廣譜中和不同基因型病毒，在A129小鼠模型中使存活率提升至100%，并顯著降低肝臟、肺部等靶器官的病毒載量，為開發新型抗病毒療法提供依據。
JinAh Lee | Hyojung Lee | Young-Sun Sohn | Seungtaek Kim
韓國首爾市圣南區韓國巴斯德研究所人畜共患病病毒實驗室
摘要
嚴重發熱伴血小板減少綜合征（SFTS）是一種由SFTS病毒（也稱為Dabie bandavirus）傳播的蜱傳傳染病。該疾病在東亞地區呈地方性流行，其特征為高熱、血小板減少、白細胞減少和多器官衰竭，病死率為10%至30%。盡管SFTS病毒對公共衛生構成重大威脅，但目前尚無可用疫苗或針對性的抗病毒治療方法。在本研究中，我們通過一系列體外和體內實驗探討了從SFTS病毒感染者體內提取的抗體Ab10的治療潛力。首先，我們證實了Ab10在體外能夠中和多種基因型的SFTS病毒，隨后進行了體內療效評估。利用A129小鼠模型，我們評估了感染SFTSV后使用抗Gn單克隆抗體Ab10治療的存活率和病毒滴度。研究結果顯示，接受Ab10治療的組別存活率為100%，這證明了其保護作用。此外，與未治療組相比，Ab10顯著降低了肝臟、肺部、脾臟和淋巴結等主要靶器官中的病毒RNA水平。這些結果表明，Ab10可能成為治療SFTS的有效候選藥物，并有助于開發有效的抗病毒療法。
引言
嚴重發熱伴血小板減少綜合征（SFTS）是一種由SFTS病毒（SFTSV）引起的蜱傳傳染病，該病毒屬于Phenuiviridae家族（Takahashi等人，2014年；T. Yang等人，2022年）。該疾病于2009年首次在中國被發現（XJ等人，2011年），此后在東亞地區（包括韓國和日本）成為地方性流行病，其他地區也有零星病例報告（Choi等人，2016年；E. H. Kim和Park，2023年；Takahashi等人，2014年；Takayama-Ito和Saijo，2020年）。SFTS的特點是血小板減少、白細胞減少、多器官功能障礙和敗血癥性休克，病死率在10%至30%之間（J. C. Li等人，2022年；Seo等人，2021年；J. Sun等人，2015年）。SFTSV的快速地理擴散主要通過Haemaphysalis longicornis蜱蟲傳播，并具有潛在的人畜共患風險，這對公共衛生監測和控制措施提出了嚴峻挑戰（Z. Li等人，2016年；Zhang等人，2022年）。SFTSV的高死亡率以及缺乏批準的疫苗或抗病毒藥物（日本僅有favipiravir）凸顯了迫切需要研究有效的診療策略來應對這一日益嚴重的公共衛生問題。
SFTSV的發病機制較為復雜，涉及直接的病毒細胞毒性效應和宿主免疫調節紊亂（Bopp等人，2020年）。病毒通過蜱蟲叮咬傳播后，主要攻擊樹突狀細胞和巨噬細胞，導致全身性擴散（Seo等人，2021年；T. Yang等人，2022年）。SFTSV感染會引發細胞因子風暴，表現為IL-6、TNF-α和IFN-γ等炎癥細胞因子水平升高，進而導致血管損傷、凝血功能障礙和器官損傷（Huang等人，2023年；Y. Sun等人，2012年；Wang等人，2022年；Wang等人，2022年；Xu等人，2024年）。此外，病毒通過靶向關鍵信號分子（包括RIG-I、TBK1和IRF3）抑制I型干擾素反應，主要通過其非結構蛋白NSs實現。這種干預抑制了下游JAK-STAT信號通路及干擾素刺激基因（ISGs）的表達（Casel等人，2021年；Yoshikawa等人，2023年）。肝臟、脾臟和淋巴結是最受影響的器官，在嚴重感染時這些組織中的病毒載量顯著增加（Oh等人，2024年；Sakai等人，2021年）。
從結構上看，SFTSV是一種包膜病毒，具有負鏈單鏈RNA基因組，由三個片段組成：大片段（L）、中等片段（M）和小片段（S）（Halldorsson等人，2016年；Lei等人，2015年）。L片段編碼RNA依賴性RNA聚合酶，M片段編碼包膜糖蛋白Gn和Gc，S片段編碼核衣殼蛋白和非結構蛋白NSs（Kwak等人，2019年）。Gn和Gc糖蛋白對病毒侵入宿主細胞至關重要，有助于病毒附著和融合（D. Kim等人，2023年）。這些蛋白具有高度免疫原性，是疫苗和治療性抗體開發的主要靶點（Ren等人，2024年）。特別是針對Gn糖蛋白的中和抗體在破壞病毒生命周期方面顯示出良好效果，有效阻斷了病毒感染宿主細胞的能力（D. Kim等人，2023年；P. Yang等人，2024年）。然而，大多數抗體候選物仍處于臨床前研究階段，其在中和多種SFTSV基因型方面的有效性——這是決定其廣譜治療潛力的關鍵因素——尚未得到充分證實。
我們之前的研究鑒定并表征了針對Gn糖蛋白的單克隆抗體Ab10（K. H. Kim等人，2019年）。該抗體來自一名從SFTSV感染中康復的患者的血漿，在體外表現出強烈的中和活性。Ab10以高親和力結合Gn蛋白上的保守表位，有效阻斷病毒附著和進入宿主細胞。盡管有這些有希望的發現，但對其在體內的療效（如減輕疾病嚴重程度和降低SFTSV常見靶器官中的病毒載量）仍需進一步評估。此外，鑒于病毒的遺傳多樣性及其對不同流行病學環境下治療效果的影響，Ab10中和不同基因型SFTSV的能力尤為重要。
在本研究中，我們在SFTSV感染的小鼠模型（A129小鼠）中評估了Ab10抗體的保護效果。這種小鼠模型缺乏I型干擾素（干擾素α/β）受體基因（IFNAR1），易受SFTSV感染。具體而言，我們評估了其對存活率、體重維持以及肝臟、肺部、脾臟和淋巴結等關鍵靶器官中病毒載量減少的影響。此外，我們還評估了Ab10是否對多種SFTSV基因型具有交叉中和活性，從而評估其作為通用治療藥物的潛力。通過解決這些關鍵問題，本研究加深了對基于抗體的SFTS治療策略的理解，并為其發展為有效的治療手段奠定了基礎。
部分摘錄
病毒、細胞和抗體
所有SFTSV基因型均由韓國疾病控制與預防機構提供。病毒在Vero E6（CRL-1587，ATCC）細胞中培養，使用Dulbecco改良的Eagle培養基（DMEM）（LM001-07，Welgene），并添加2%熱滅活的胎牛血清（FBS，16000044，Gibco）和青霉素-鏈霉素（10378016，Gibco）。病毒滴度通過Vero E6細胞中的空斑形成試驗確定。
Ab10對SFTSV感染小鼠模型的影響
缺乏I型干擾素（干擾素α/β）受體基因（IFNAR1）的小鼠（A129小鼠）是用于評估SFTSV感染和發病機制的動物模型。我們在感染了SFTSV（Gangwon/Korea/2012）的A129小鼠（每組4只，雄性和雌性）上測試了我們的抗Gn抗體（Ab10）。小鼠被分為三組：一組感染SFTSV并接受Ab10抗體治療，另一組感染SFTSV并接受磷酸鹽緩沖鹽水（PBS）作為安慰劑。
討論
在本研究中，我們證明了抗Gn單克隆抗體Ab10在A129小鼠模型中對SFTSV感染的保護效果。研究結果表明，Ab10治療顯著改善了存活率，并通過降低關鍵靶器官中的病毒載量減輕了疾病嚴重程度。此外，Ab10對多種SFTSV基因型具有廣譜中和作用，顯示出其作為治療候選物的潛力。
我們的體內實驗結果強調了……
作者貢獻聲明
JinAh Lee：概念構思、數據整理、數據分析、方法研究、驗證、初稿撰寫、審閱與編輯。
Hyojung Lee：概念構思、數據整理、數據分析、方法研究、驗證、初稿撰寫。
Young-Sun Sohn：概念構思、資金獲取、研究支持、資源協調、審閱與編輯。
Seungtaek Kim：概念構思、資金獲取、研究支持。利益沖突聲明
作者聲明沒有已知的財務利益或個人關系可能影響本文的研究結果。
致謝
本研究的病原體資源由韓國疾病控制與預防機構（KDCA）和首爾國立大學醫院提供。本研究得到了韓國政府（HI20C0564和RS-2024-00398073）的資助。
