富含枸杞多糖（Lycium barbarum polysaccharides）的提取物通過調節腸道微生物群（gut microbiota）來影響Tfh/B細胞軸，從而改善類風濕性關節炎（rheumatoid arthritis）
《Phytomedicine》：Lycium barbarum Polysaccharides-enriched extract Ameliorate Rheumatoid Arthritis via Gut microbiota-mediated regulation of the Tfh/B cell axis
編輯推薦：
腸道菌群失調與Tfh/B細胞軸異常在類風濕關節炎（RA）中起關鍵作用，狼果多糖（LBP）通過調節菌群平衡（增加Ligilactobacillus/limosilactobacillus，減少Blautia）抑制Tfh細胞增殖及IL-6、IL-21等炎癥因子分泌，改善關節炎癥和腸道屏障功能。
蔣春雷|陳丹艷|李靜|岳曉琪|王碩|曹甘|池淑紅|張彥莉
寧夏醫科大學基礎醫學院病原生物學與免疫學系，中國寧夏銀川
摘要
背景
腸道微生物群失調與類風濕性關節炎（RA）有關。雖然枸杞多糖提取物（LBP）以其抗炎和免疫調節作用而聞名，但其確切的微生物驅動因素及潛在機制，包括其與T濾泡輔助（Tfh）細胞/B細胞軸的關聯，仍不明確。
目的
本研究旨在探討RA患者和CIA大鼠的腸道微生物群變化，并評估LBP是否通過調節腸道微生物群來改善RA。
方法
通過16S rRNA基因測序分析了RA患者和CIA大鼠的腸道微生物群組成。為了研究LBP的治療效果，采用了流式細胞術、ELISA和蘇木精-伊紅（HE）染色方法。
結果
RA患者的腸道微生物群α多樣性顯著降低，Ligilactobacillus和Escherichia-Shigella的數量減少，而Blautia的數量增加。在CIA大鼠模型中，LBP治療通過增加Ligilactobacillus和Limosilactobacillus的數量并減少Blautia的數量來對抗觀察到的微生物群變化。具體而言，LBP降低了脾臟Tfh細胞和B細胞的比例，并降低了血清中的IgG、IL-6和IL-21水平。它還減少了關節組織中的炎癥浸潤和滑膜增生，并修復了結腸隱窩結構。
結論
腸道微生物群失調和Tfh細胞的異常激活可能在RA的發展和進展中起關鍵作用。在人類患者和CIA大鼠模型中，Ligilactobacillus和Blautia與RA的病理過程有關。LBP可能抑制Tfh細胞的過度增殖以及隨后的B細胞異常分化。值得注意的是，這些關鍵細菌屬的變化可能與Tfh細胞過度激活和異常體液免疫反應的調節有關。
引言
類風濕性關節炎（RA）是一種長期的免疫系統疾病，其特征是關節炎癥、局部骨骼和軟骨破壞以及全身性炎癥反應（Jiyad等人，2025年）。盡管疾病的完整起源仍不清楚，但免疫激活失調是RA發病機制的關鍵驅動因素（Lu等人，2021年）。失調的Tfh細胞會過度激活B細胞，促使產生自身抗體，包括類風濕因子（RF）和抗環瓜氨酸肽（anti-CCP）。這些抗體會形成免疫復合物沉積在關節中，隨后通過補體激活引發炎癥，導致關節組織損傷。此外，Tfh細胞分泌高水平的細胞因子如IL-21，激活信號通路，刺激其他免疫細胞（包括巨噬細胞）。這一級聯反應促使促炎細胞因子（如TNF-α和IL-6）的釋放，從而建立了一個自我持續的炎癥循環，推動疾病進展和關節損傷（Wei和Niu，2023年）。目前的RA治療方法旨在抑制細胞因子分泌或免疫信號傳導。然而，這種廣泛的活性往往會導致特異性不足，長期使用可能會引起感染和免疫功能障礙（Klareskog和Alfredsson，2023年）。因此，尋找安全有效的天然化合物用于RA管理仍然是一個具有重大臨床意義的研究重點。
腸道微生物組包含約100萬億微生物，通過調節免疫系統在維持宿主穩態中發揮重要作用（Hou等人，2025年）。宿主免疫系統在維持對共生微生物的耐受性同時控制潛在病原體方面起著關鍵作用（Heidari等人，2024年）。重要的是，最近的多項研究揭示了腸道微生物群失調與類風濕性關節炎發展之間的強烈關聯（Chasov等人，2024年；Yoo等人，2020年）。RA患者的腸道微生物群組成與健康個體顯著不同，表現為Prevotella的增加、Clostridium的減少以及微生物多樣性的降低（Miyauchi等人，2023年）。這種失調可能通過免疫調節、代謝相互作用改變和腸道屏障功能受損來促進RA的發病。
動物實驗表明，腸道微生物群在RA中的致病作用，例如通過從患者糞便移植到無菌小鼠中誘導關節炎。相比之下，像乳桿菌和雙歧桿菌這樣的益生菌通過緩解關節炎癥顯示出治療潛力（P. Belvoncikova等人，2022年）。這些發現表明腸道微生物群失調會驅動RA的發展。因此，恢復健康的微生物平衡代表了一種有前景的治療策略。
枸杞（Lycium barbarum）作為一種具有悠久藥用和食用歷史的植物，在傳統中醫中常用于滋養肝腎、增強視力和促進生理平衡。最近的藥理學研究進一步發現，其核心活性成分——枸杞多糖提取物（LBP）是其免疫調節和抗炎作用的關鍵物質（Wang等人，2024年）。LBP是一種由多種單糖通過復雜糖苷鍵連接而成的大分子聚合物，表現出顯著的生物活性。在CIA小鼠模型中，LBP顯示出減少關節炎癥的潛力（Liu等人，2015年）。最近，LBP作為潛在的益生元受到了關注（Zhu等人，2020年）。它增強了有益細菌（包括雙歧桿菌和乳桿菌）的生長和活性，同時調節免疫反應（Zhou等人，2018年；Zhu等人，2020年）。因此，我們的假設是LBP通過調節腸道微生物群和免疫反應來緩解炎癥。針對腸道微生物組使用LBP可能為RA提供一種新的治療途徑。
本研究初步描述了RA患者腸道微生物群的變化及其與Tfh細胞的關系。隨后，我們建立了膠原誘導的關節炎大鼠模型，并通過評估關節腫脹、炎癥細胞因子水平以及Tfh細胞和B細胞的比例來評估LBP的免疫調節作用。此外，我們還研究了LBP通過調節腸道微生物群來緩解RA進展的潛在機制。
材料與試劑
枸杞多糖提取物（LBP，多糖含量：77.3%）由寧夏枸杞枸杞產業有限公司提供。甲氨蝶呤購自上海上藥新義藥業有限公司。用于檢測人類TNF-α、IL-6和IL-10以及大鼠IL-6、IL-21和IgG的ELISA試劑盒來自上海江萊生物技術公司。針對人類（CD4、CXCR5、CD19、ICOS）和大鼠（CD4、CD3、CXCR5、ICOS、B220）目標的單克隆抗體由eBioscience公司提供
研究參與者
共有32人參與了這項研究。其中包括16名在風濕病學和免疫學部門接受治療的RA患者，以及16名來自寧夏醫科大學總醫院健康檢查中心的健康人。所有患者均符合2010年ACR/EULAR的RA分類標準。寧夏醫科大學的機構審查委員會（批準編號#2024-NO71）批準了這項研究，所有參與者均提供了書面知情同意書
麻醉程序
在侵入性操作（如心臟采血、組織取樣）之前，通過腹腔注射戊巴比妥鈉（45 mg/kg體重）對膠原誘導的關節炎（CIA）模型大鼠進行深度麻醉。麻醉效果通過角膜反射消失、肌肉松弛、無自主運動和呼吸穩定來確認。在整個麻醉過程中，大鼠保持在加熱墊上以保持體溫，并密切監測生命體征直至手術結束
組織染色
病理變化在光學顯微鏡下觀察和分析。脾臟、滑膜和結腸樣本浸入4%的甲醛中，包埋在石蠟中，切成3 μm厚的切片，并用蘇木精和伊紅（H&E）染色，以便通過光學顯微鏡進行病理變化的分析。統計分析
所有實驗數據使用SPSS（版本29.0）和GraphPad Prism（版本10.0）軟件包進行分析。數據以平均值±標準差表示。組間差異通過獨立樣本檢驗或單因素方差分析（ANOVA）進行評估，隨后進行Tukey的多重比較檢驗。Spearman等級相關性用于分析腸道微生物群的相對豐度與Tfh細胞百分比之間的關聯。值小于0.05
類風濕性關節炎患者的腸道微生物群分析
對16名RA患者和16名健康對照者的糞便樣本中的16S rRNA基因進行測序，共發現749個擴增子序列變異（ASVs）。其中，147個ASV僅存在于RA組，167個僅存在于健康對照組，435個同時存在于兩組（圖1A）。RA患者的腸道微生物多樣性和豐富度降低，表現為Chao1、ACE、Shannon指數以及觀察到的物種指數顯著低于健康對照組（圖1B）。主要討論
類風濕性關節炎是一種慢性自身免疫性疾病，其特征是雙手或雙腳關節的炎癥、關節周圍組織的增厚（滑膜增生）、炎癥細胞侵入關節以及促炎細胞因子的產生增加。最終，這會導致關節逐漸損傷和功能障礙（Brown等人，2024年）。除了其物理表現外，RA還顯著影響患者的生活質量
結論
本研究表明，LBP可能通過調節腸道微生物群和Tfh/B細胞軸來緩解RA。實驗結果表明，LBP干預促進了有益微生物（如Ligilactobacillus）的生長，同時減少了潛在有害菌屬（如Blautia）的數量，從而有助于恢復腸道微生物平衡。此外，LBP干預還與Tfh細胞過度激活和B細胞
CRediT作者貢獻聲明
蔣春雷：撰寫——原始草稿、軟件使用、方法學設計、數據分析。陳丹艷：實驗研究、數據分析。李靜：方法學設計、數據分析。岳曉琪：軟件使用、實驗研究。王碩：軟件使用、實驗研究。曹甘：驗證、監督。池淑紅：數據可視化、監督。張彥莉：撰寫——審稿與編輯、監督、概念構思。致謝
本研究得到了寧夏自然科學基金計劃（資助編號：2023AAC03184）的支持。我們感謝寧夏醫科大學（銀川）病原生物學重點實驗室的所有成員提供的寶貴幫助。
