生物通報道：最近，在國際知名雜志《Analytical Chemistry》發(fā)表的一項研究中，美國萊斯大學(xué)的生物工程師們研發(fā)出一種簡單、高度精確的檢測技術(shù)，來檢測患者體內(nèi)的HIV跡象及病情發(fā)展情況。

萊斯大學(xué)生物工程師、全球衛(wèi)生技術(shù)學(xué)院的主任Rebecca Richards-Kortum稱，當(dāng)前診斷嬰兒HIV和監(jiān)測病毒載量的金標(biāo)準(zhǔn)，通常是依賴僅在診所可用的實驗室設(shè)備和專業(yè)技術(shù)。這項研究，開發(fā)出以核酸為基礎(chǔ)的新型HIV檢測技術(shù)，能夠在醫(yī)療保健單位進(jìn)行檢測。

本文共同第一作者是Richards-Kortum 實驗室的研究生Zachary Crannell和Brittany Rohrman，他們開展了這項概念驗證性工作，在今年早些時候，他們利用類似的技術(shù)檢測到引起腹瀉病隱孢子蟲病的寄生蟲。

這項新型檢測技術(shù)，用基于重組酶聚合酶擴增（RPA）技術(shù)取代了基于聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)的復(fù)雜實驗室程序，RPA可以對血液中的遺傳標(biāo)記物進(jìn)行快速多重擴增，從而使病毒的遺傳標(biāo)記物很容易地檢測到。在一個被稱為qRPA的檢測中，利用可通過輕便機器進(jìn)行定量檢測的熒光探針，靶定和標(biāo)記HIV DNA中的一段特定序列。最后，通過熒光DNA的軟件分析，就可使得臨床醫(yī)生以極高的準(zhǔn)確性，來確定病毒是否存在于患者的血液內(nèi)，或病毒的量是多少。

研究人員通過放大內(nèi)部陽性對照對測試進(jìn)行校準(zhǔn)。Rohrman稱：“利用跟HIV序列相同的引物擴增，因此檢測試驗可以正常進(jìn)行。”研究人員最初只是打算尋找嬰兒中的HIV，但是該技術(shù)還可以幫助他們追蹤老年患者機體中的病毒載量。Crannell稱：“臨床醫(yī)生能夠?qū)崟r監(jiān)測患者體內(nèi)的病毒載量，從而確保患者是否對治療發(fā)生反應(yīng)，這非常的重要。”

研究人員稱，為了臨床可行性，一種HIV DNA檢測能夠定量的病毒載量，必須超過四個數(shù)量級，從很高到很低。他們稱，這種新型試驗很容易滿足這個目標(biāo)。

他們正在開發(fā)用于資源匱乏地區(qū)的工具，在這些地區(qū)高科技實驗室設(shè)備無法使用。盡管研究人員使用熱循環(huán)儀來進(jìn)行檢測，但他們正在研究一種技術(shù)，使得整個操作步驟維持在室溫和體溫之間，從而確保實驗的通用性和準(zhǔn)確性。

（生物通：王英）

延伸閱讀：華人學(xué)者《德國應(yīng)用化學(xué)》：新的HIV疫苗研制方法

生物通推薦原文摘要：
Quantification of HIV-1 DNA Using Real-Time Recombinase Polymerase Amplification
Abstract: Although recombinase polymerase amplification (RPA) has many advantages for the detection of pathogenic nucleic acids in point-of-care applications, RPA has not yet been implemented to quantify sample concentration using a standard curve. Here, we describe a real-time RPA assay with an internal positive control and an algorithm that analyzes real-time fluorescence data to quantify HIV-1 DNA. We show that DNA concentration and the onset of detectable amplification are correlated by an exponential standard curve. In a set of experiments in which the standard curve and algorithm were used to analyze and quantify additional DNA samples, the algorithm predicted an average concentration within 1 order of magnitude of the correct concentration for all HIV-1 DNA concentrations tested. These results suggest that quantitative RPA (qRPA) may serve as a powerful tool for quantifying nucleic acids and may be adapted for use in single-sample point-of-care diagnostic systems.