本文探討了應(yīng)用新型高保真基因編輯系統(tǒng)Cas-CLOVER,在懸浮適應(yīng)型CHO-K1細(xì)胞中順序敲除位于染色體5(GS5)和染色體1(GS1)的內(nèi)源性谷氨酰胺合成酶(GS)基因,成功構(gòu)建了雙敲除(GS-DKO)宿主細(xì)胞平臺(命名為CleanCut GS)。研究通過與CRISPR/Cas9對比,驗證了Cas-CLOVER在GS5與GS1位點更高的編輯效率(84% vs. 57.4%;74% vs. 62%)及在40個預(yù)測脫靶位點均未檢測到脫靶突變。該平臺結(jié)合專有的Harbor-IN轉(zhuǎn)座子系統(tǒng)穩(wěn)定表達(dá)曲妥珠單抗后,在24深孔板補料分批培養(yǎng)14天后,細(xì)胞特異性生產(chǎn)力(Qp)超過100 pg/細(xì)胞/天,抗體滴度大于5 g/L,且產(chǎn)量穩(wěn)定性可維持超過60代。本研究為生物制藥工業(yè)提供了具有高生產(chǎn)效率、低脫靶風(fēng)險的CHO細(xì)胞系開發(fā)新工具和新平臺。